Caracterización de un péptido de origen catiónico como alternativa a los vectores virales para el tratamiento de enfermedades tumorales mediante terapia génica
- Autores: Miguel Manuel Sanchez Martos
- Directores de la Tesis: Gema Martinez Navarrete (dir. tes.), Eduardo Fernández Jover (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad Miguel Hernández de Elche ( España ) en 2024
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: José Luis Pedraz Muñoz (presid.), Angela Sastre Santos (secret.), Pablo Botella Asución (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Bioingeniería por la Universidad Miguel Hernández de Elche
- Materias:
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- Resumen
El neuroblastoma es un tipo de cáncer infantil, con una tasa de superviven-cia muy baja. Por su localización, los tratamientos convencionales no son los sufi-cientemente eficaces para revertir esta situación. Por ello se buscan alternativas a dichos tratamientos, siendo la terapia génica una de las técnicas más prometedo-ras. El principal inconveniente que se presenta es la dificultad que tienen las se-cuencias nucleotídicas de atravesar la membrana plasmática de las células tumo-rales, por lo que se debe recurrir a la ayuda de elementos transportadores para realizar esta función, conocidos como vectores.
Los vectores utilizados en terapia génica pueden ser de origen viral o no vi-ral. En base a los ensayos realizados con anterioridad, en este trabajo nos cen-tramos en la búsqueda de un vector no viral basado en un tipo de proteínas co-nocidas como CPPs, que tienen la capacidad por sí mismas de atravesar la membraba plasmática, con el objetivo de transfectar células de la línea SH-SY5Y en experimentos in vitro. En un principio se trabajó con un péptido diseñado a medida, pero con el objetivo de mejorar los resultados obtenidos, y en base a las referencias bibliográficas estudiadas, se decidió cambiar la línea de trabajo por un péptido catiónico comercial utilizado habitualmente en cultivos celulares para me-jorar la adherencia de las células, el PLL, pero el rendimiento de este péptido en los ensayos de transfección realizados, no fueron lo suficientemente satisfactorios en las líneas celulares estudiadas, por lo que se decidió recurrir al PDL (poli-D-lisina) que es el enantiómero del PLL (poli-L-lisina). Los resultados obtenidos en los experimentos indican que el PDL tiene la capacidad de empaquetar el ADN, de protegerlo de las enzimas que pueden degradarlo presentes en el torrente san-guíneo, y que puede ser un excelente vector para los tratamientos de terapia gé-nica en la línea SH-SY5Y mejorando al mejor vector utilizado hasta la fecha para dicha línea celular, la Turbofectina 8.0, en lo que se refiere a la línea celular HeLa, el rendimiento se redujo considerablemente, siendo en la línea 3T3 en la que no se consiguió transfectar prácticamente ninguna célula. A raíz de los resultados se puede concluir que el PDL puede ser un buen candidato para tratamientos de te-rapia génica en enfermos de neuroblastoma, por lo que el siguiente paso sería la realización de experimentos in vivo.
Con los experimentos llevados a cabo a lo largo de estos años, se han pu-blicado tres artículos, en el primero de ellos, se trabajó el desarrollo del profárma-co CPT 5-ALA, en el segundo artículo, se analizan las posibilidades del PDL para transfectar las líneas HeLa, 3T3 y SH-SY5Y responsable de la patología conocida como neuroblastoma, y en el tercer artículo se estudió la capacidad de unos compuestos derivados del imidazol para realizar ensayos de terapia fotodinámica en células tumorales.
