Identificación de los sitios de inicio de la transcripción y elaboración del mapa de transcripción del genoma mitocrondrial de "Artemia franciscana"
- Autores: José Alberto Carrodeguas Villar
- Directores de la Tesis: Carmen García Vallejo (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 1994
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Antonio Sillero Repullo (presid.), Rafael Garesse (secret.), Julio Montoya Villaroya (voc.), José Manuel Cuezva Marcos (voc.), Leandro Sastre Garzon (voc.)
- Materias:
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- Resumen
EN ESTE TRABAJO SE HA ESTUDIADO LA ENPRESION DEL GENOMA MITOCONDRIAL DEL CRUSTACEO ARTEMIA FRANCISCANA A NIVEL DE LA TRANSCRIPCION, SIENDO EL PRIMER TRABAJO DE ESTE TIPO QUE SE REALIZA EN UN SISTEMA INVERTEBRADO. SE HAN REALIZADO ESTUDIOS EN DOS LINEAS DISTINTAS PERO RELACIONADAS. POR UN LADO, SE HAN IDENTIFICADO LOS PRINCIPALES SITIOS DE INICIACION DE LA TRANSCRIPCION IN VIVO USANDO LA TECNICA DEL MARCAJE DE EXTREMOS 5' NACIENTES DE RNA CON LA ENZIMA GUANILIL TRANSFERASA DEL VIRUS DE LA VACUNA Y (ALFA- 32P)GTP(CAPPING IN VITRO).
ESOS INICIOS DE TRANSCRIPCION SE HAN MAPEADO A NIVEL DE NUCLEOTIDO EMPLEANDO LAS TECNICAS DE EXTENSION DEL CEBADOR, PROTECCION A NUCLEASA S1 Y PROTECCION A RNASA.
POR OTRO LADO, SE HA CONSTRUIDO EL MAPA DE TRANSCRIPCION MEDIANTE LA TECNICA DE NORTHERN, PARA LO CUAL SE HAN REALIZADO HIBRIDACIONES CON DISTINTOS TIPOS DE SONDAS DERIVADAS DE REGIONES CONCRETAS DEL GENOMA MITOCONDRIAL.
ASI, SE HAN USADO SONDAS DE DNA DE CADENA DOBLE, SONDAS DE RNA (RIBOSONDAS) Y OLIGONUCLEOTIDOS DE CADENA SENCILLA.
EL PRINCIPAL SITIO DE INICIO DE LA TRANSCRIPCION DEL GENOMA MITOCONDRIAL DE ARTEMIA SE LOCALIZA EN EL MISMO EXTREMO 5' DEL RNA RIBOSOMICO (RRNA)12S, EN UNO DE LOS EXTREMOS DE LA REGION NO CODIFICANTE, RICA EN A T. ESE INICIO DE TRANSCRIPCION ES HETEROGENEO, OCURRIENDO A LO LARGO DE VARIOS NUCLEOTIDOS CONSECUTIVOS. LA SECUENCIA QUE RODEA ESE INICIO SE PUEDE PLEGAR EN UNA ESTRUCTURA SECUNDARIA CRUCIFORME. TODOS NUESTROS DATOS SUGIEREN LA EXISTENCIA DE, AL MENOS, UN SEGUNDO SITIO DE INICIO DE LA TRANSCRIPCION, USADO CON MENOS FRECUENCIA, SITUADO A UNOS 250 NUCLEOTIDOS CADENA ARRIBA RESPECTO AL ANTERIOR. ESTOS DOS SITIOS DARIAN CUENTA DE LA TRANSCRIPCION DE LA CADENA PESADA (H) DEL GENOMA MITOCONDRIAL DE ARTEMIA.
LA BUSQUEDA DE UN SITIO DE INICIO PARA LA TRANSCRIPCION DE LA CADENA LIGERA (L) USANDO LAS MISMAS TECNICAS HA PRESENTADO MAYORES DIFICULTADES. NO OBSTANTE, SE HA IDENTIFICADO AL MENOS UN POSIBLE CANDID
