Terapia génica somática frente a la infección por HIV-1Inmunización intracelular de células T periféricas mediante inhibición de la expresión en superficie del correceptor CCR5

• Autores: José Luis Abad Mínguez
• Directores de la Tesis: Antonio Bernad Miana (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2002
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Balbino Jose Alarcon Sanchez (secret.), Rafael Delgado Vázquez (voc.), Juan Antonio Bueren Roncero (voc.), Ignacio Jesús Molina Pineda de las Infantas (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
  • Ciencias de la vida
    • Biología celular
      • Cultivo celular
    • Biología molecular
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• Resumen

  • En este trabajo se describe la construcción y caracterización de una nueva familia de vectores retrovirales derivados del virus de la leucemia murina (Mo-MLV). Todos ellos se han generado con el objetivo final de ser empleados en el desarrollo de protocolos pre-clínicos de Terapia Génica Somática, y de poder obtener, de forma rápida y eficiente, pequeños lotes de las partículas virales correspondientes para su evaluación preliminar.

    Esto se consigue mediante el uso del sistema de empaquetamiento transitorio, utilizando la linea celular 293T, puesto a punto en el laboratorio durante el transcurso de esta Tesis.

    El esquema de expresión de los vectores atiende a una estrategia bicistrónica, donde tanto el gen de interés (terapéutico) como el correspondiente marcador de selección se encuentran bajo el control del mismo promotor (LTR), y se co-expresan gracias a la inserción de una secuencia de entrada del ribosoma (IRES) localizada entre ambas unidades. Se han construído cuatro vectores distintos, utilizando marcadores de selección independientes (LacZ, AhNGFR, AhGHR y EGFP). Todos ellos son útiles en distintas fases del desarrollo de los protocolos pre-clínicos. La nueva familia de vectores se ha contrastado tanto en lo relativo a eficiencia de empaquetamiento y capacidad para infectar células primarias murinas y humanas, estabilidad de la expresión y bioseguridad.

    Tras la evaluación de las nuevas herramientas desarrolladas, éstas se utilizaron para abordar el modelo funcional que ha sido objeto central de esta Tesis: Inhibición funcional de la expresión en superficie de la molécula CCR5, un receptor de quimioquinas, con especial dedicación al modelo de infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV-1).

    Se diseñaron, construyeron y evaluaron varias construcciones con potencial de inhibición atendiendo a distintos mecanismos. Inicialmente se ensayaron en sistemas celulares mediante ensayos de co-tra