Receptores de quimioquinas implicados en la diseminación ganglionar de síndromes linfoproliferativos de células B papel de CCR7 en la leucemia linfática crónica-B

• Autores: Sonia López Giral
• Directores de la Tesis: Cecilia Muñoz Calleja (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2008
• Idioma: español
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• Resumen

  • 1 - INTRODUCCIÓN 1. Quimioquinas...........................................................................................15 1.1. Nomenclatura y clasificación..............................................................................15 1.2. Receptores de quimioquinas...........................................................................17 2. Señalización de los receptores de quimioquinas.............................................18 2.1. Introducción........................................................................................................................18 2.2. Familia de las MAPKs.....................................................................................19 2.3. Familia de pequeñas GTPasas Rho...........................................................20 2.4. Familia de fosfatidilinositol-3"-OH quinasas (PI3K).......................................21 3. Órganos linfoides...................................................................................................22 3.1. Estructura de los ganglios linfáticos.............................................................23 4. Quimioquinas y tráfico leucocitario......................................................................24 4.1. Homing linfocitario a órganos linfoides secundarios....................................24 4.2. Interacción T/B en el interior de los tejidos linfoides...................................26 4.3. CCR7 y sus ligandos: CCL19 y CCL21......................................................28 4.4. Señalización intracelular inducida por CCR7................................................29 5. Receptores de quimioquinas y metástasis........................................................29 5.1. Cáncer y metástasis.........................................................................................29 5.2. Las quimioquinas y su papel en las metástasis...........................................30 6. Linfomas no Hodgkin de células B (LNH-B).......................................................30 6.1. Leucemia linfática crónica de células B.....................................................32 6.2. Factores pronósticos de la LLC-B...............................................................33 2 " OBJETIVOS..................................................................................35 3 - MATERIALES Y MÉTODOS 1. Pacientes y células.............................................................................................38 2. Citometría de flujo.............................................................................................39 3. Quimioquinas, anticuerpos e inhibidores......................................................39 4. Ensayo de quimiotaxis in vitro.............................................................................40 5. Ensayo de polimerización de actina....................................................................41 6. Ensayo de internalización del receptor................................................................41 7. Estudio del estado mutacional de los genes IgVH..........................................41 ÍNDICE 8. Ensayo de Western Blot........................................................................42 9. Nucleofecciones........................................................................................................43 10. Análisis estadístico.......................................................................................................................43 4 - RESULTADOS 1. Estudiar los patrones de expresión de receptores de quimioquinas de neoplasias de células B para profundizar en el conocimiento de sus patrones de migración y metastatización........................................................................................46 1.1. La LLC-B y los LNH-B caracterizados por una amplia diseminación ganglionar expresan altos niveles de los receptores de las principales quimioquinas homeostáticas: CCR7, CXCR4 y CXCR5................................................................................................................46 2. Estudiar si el patrón de expresión de receptores de quimioquinas de una neoplasia B es similar al de su equivalente celular normal o es el resultado de una transformación neoplásica..................................50 2.1. El patrón de expresión de receptores de quimioquinas de una neoplasia B refleja el de su célula normal de origen....................................................................................50 3. Caracterización funcional del receptor de quimioquinas CCR7.............................................52 3.1. El patrón de quimiotaxis de diferentes poblaciones de células B está relacionado con los niveles de expresión de receptores de quimioquinas..........................................52 3.2. La estimulación de CCR7 induce la polimerización de actina en células LLC-B...............55 3.3. CCL19, pero no CCL21, induce la internalización de CCR7 en células de LLC-B............56 4. Estudiar una posible correlación de la quimiotaxis y la expresión de CCR7 en células de LLC-B con la presencia de linfadenopatías y otros factores pronósticos................................57 4.1. La capacidad de las células LLC-B para migrar en respuesta a los ligandos de CCR7 correlaciona con la presencia de linfadenopatía clínica en los pacientes.........57 4.2. Ni la capacidad quimiotáctica, ni la expresión de superficie de CCR7 de células de LLC-B correlaciona con diversos factores pronósticos...........................................59 5. Caracterización de las principales vías de señalización implicadas en la quimiotaxis mediada por CCR7 de células de LLC-B..................................................60 5.1. CCL19 y CCL21 inducen una fuerte activación de ERK1/2 en células de LLC-B dependiente de la señalización a través de proteínas Gi..............................60 5.2. CCL19 y CCL21 ejercen un efecto variable en la activación constitutiva de p38SAPK y JNK en células de LLC-B..............................................................................63 5.3. Jerarquía de activación de las MAPKs en células de LLC-B.................65 ÍNDICE 5.4. La quimiotaxis de células de LLC-B en respuesta a los ligandos de CCR7 no está mediada por la activación de la cascada de las MAPKs...............................................69 5.5. PI3K y ROCK regulan la quimiotaxis dependiente de CCR7 de células LLC-B................71 5.6. ROCK, pero no PI3K, regula la quimiotaxis dependiente de CCR7 de células B normales de sangre periférica......................76 5 - DISCUSIÓN 1. Estudio del patrón de expresión de receptores de quimioquinas en diferentes neoplasias de células B..........................................................................................................79 " La LLC-B y los linfomas no Hodgkin caracterizados por una amplia diseminación ganglionar de las células neoplásicas expresan altos niveles de CCR7, CXCR4 y CXCR5................................................................................................................................79 " El patrón de expresión de receptores de quimioquinas en las neoplasias hematológicas de células B refleja el de sus supuestos equivalentes celulares normales..........81 "La mayor respuesta quimiotáctica in vitro de las células LLC-B en respuesta a CCL19 y CCL21 correlaciona con la presencia de linfadenopatía clínica en los pacientes.....82 " CCL19, pero no CCL21, induce la internalización del receptor.......................84 2. Caracterización de las vías de señalización implicadas en la respuesta quimiotáctica de células LLC-B a los ligandos de CCR7...................................................................85 " La actividad de la cascada de las MAPKs no es necesaria para la quimiotaxis de células LLC-B en respuesta a CCL19 y CCL21.............................................................86 " La actividad PI3K regula parcialmente la quimiotaxis in vitro de células LLC-B, pero no de células B normales, mediada por CCR7......................................................89 " La migración de células LLC-B en respuesta a CCL19 y CCL21 está regulada por ROCK........................................92