Identificación del residuo mayoritariamente fosforilado en la nucleoproteina del virus de la gripe de la cepa a/victoria/3/75 su importacia en el proceso de expresión del genoma viral
- Autores: Marta Arrese Penacho
- Directores de la Tesis: Agustín Portela Moreira (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 1996
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Luis Carrasco (presid.), Mauricio García Mateu (secret.), Luis Enjuanes Sanchez (voc.), Rosario Armas Portela (voc.), Rafael Muñoz Fernández (voc.)
- Materias:
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- Resumen
La nucleoproteina (np) del virus de la gripe es una proteina de 498 aminoacidos que se encuentra encapsidando cada uno de los 8 segmentos de rna de banda simple y polaridad negativa que constituye el genoma viral. La np es imprescindible para los procesos de replicacion y transcripcion del rna viral y es la unica proteina del virus que esta fosforilada en todas las cepas estudiadas.
El objeto de esta tesis consistio en primer lugar en mapear los sitios de fosforilacion de la np, y en segundo lugar en averiguar la importancia de esta modificacion posttraduccional en los procesos de replicacion y transcripcion del genoma del virus.
Para la consecucion del primer objetivo, se puso a punto un metodo de purificacion de la proteina marcada con (32p)-ortofosfato a partir de extractos de celulas infectadas, y un metodo de hidrolisis de los enlaces aspartico.Prolina. Los fragmentos resultantes de dicha hidrolisis se localizaron en la estructura primaria de la proteina mediante estimacion de su peso molecular, redigestion de los mismos y obtencion de antisueros que reconocen regiones especificos de la proteina.
Se identificaron dos dominios fosforilados, que corresponden a los extremos amino (aminoacidos 1-88) y carboxilo terminal (aminoacidos 303-498) de la np. El extremo amino terminal contiene el 70% de la radiactividad incorporada en la np marcada con (32p)-ortofosfato.
La identificacion del residuo/s mayoritariamente fosforilado/s en los primeros 88 aminoacidos, se realizo mediante el analisis de la fosforilacion de mutantes puntuales, en los que se habia sustituido individualmente cada una de las 7 serinas existentes por residuos de alanina. El mutante puntual serina 3-alanina contiene unicamente el 24% de la radiactividad respecto a la np wt marcada con (32p)-ortofosfato.
