Estudio del efecto del genotipo vegetal, cepa de Agrobacterium tumefaciens, y casete de expresión, en la expresión de la tolerancia a glifosato en variedades colombianas de soya
- Autores: Adriana Carolina Rojas Arias
- Directores de la Tesis: Alejandro Chaparro Giraldo (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad Nacional de Colombia (UNAL) ( Colombia ) en 2017
- Idioma: español
- Materias:
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- Tesis en acceso abierto en: repositorio.unal.edu.co
- Resumen
Este trabajo estudió el efecto de la interacción genotipo vegetal, genotipo bacteriano y casete de expresión, en la transformación genética de variedades colombianas de soya, mediada por Agrobacterium tumefaciens. Se desarrolló un análisis de libertad de operación, encontrando que los elementos empleados, a la fecha no infringen derechos de terceros en el territorio nacional. Se emplearon tres variedades de soya adaptadas al territorio colombiano (SK7, P29 y Soyica P34), tres cepas bacterianas (AGL0, EHA105 y ATCC 53213) y tres casetes de expresión que conferían tolerancia a glifosato (E-IGP, E-2 y pMON546). Se encontró que la desinfección por gas cloro resultó ser la más adecuada para el material empleado. Respecto a la capacidad de regeneración, la variedad P29 tenía la mayor producción de explantes con brote, con un 96,2%, pero la variedad SK7 presentó una mayor cantidad de brotes por explante, con un promedio de 17,7 (± 7,73) brotes. Se evaluaron algunas características moleculares y fenotípicas de las cepas bacterianas, y se diseñó un esquema de uso de antibióticos, que arrojó una combinación de cefotaxima + timentina, como la más adecuada. Se diseñó un esquema de selección con glifosato de largo plazo. Se obtuvieron plantas completas de las tres variedades con el casete E-IGP, y de la variedad SK7 con los tres casetes de expresión evaluados. Por pruebas moleculares y fenotípicas se determinó que la combinación que tuvo una mayor frecuencia de transformación fue la del casete E-IGP, con la variedad SK7, y la cepa bacteriana AGL0, con un 10,8% de eficiencia de transformación, y un 3,8% de transformantes que expresan el transgén. Se desarrollaron pruebas fenotípicas en invernadero, encontrando 6 líneas de la variedad SK7 y una de la variedad P29 que efectivamente toleraron la aplicación de glifosato comercial. Los resultados sugieren que hay diferencias en la capacidad de transformación vegetal de variedades de soya colombianas, asociadas a la combinación de genotipo vegetal, cepa bacteriana y casete de expresión, dejando abierta la posibilidad de desarrollo de agrobiogenéricos en Colombia, en cultivos de importancia económica como la soya.
