Bases moleculares de la replicación del coronavirus TGEV

• Autores: Carmen Galán Avella
• Directores de la Tesis: Fernando Almazán (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2007
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Juan Antonio García Alvarez (presid.), Francisco Javier Ortego Alonso (secret.), José Francisco Parra Fernández (voc.), Carles Suñé Negre (voc.), Encarnación Martínez Salas (voc.)
• Calificación: Sobresaliente Cum Laude
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Biblos-e Archivo
• Resumen

  • RESUMEN La replicación del coronavirus de la gastroenteritis porcina transmisible (TGEV) se ha estudiado mediante genética reversa, utilizando el genoma completo, RNAs defectivos y replicones. Se ha estudiado el efecto de una mutación puntual, que afecta al procesamiento in vitro nsp1/nsp2 de las poliproteínas de la replicasa, sobre la replicación del TGEV. Los requerimientos aparentes del procesamiento nsp1/nsp2 fueron diferentes para la replicación eficiente del genoma y para la amplificación de los minigenomas derivados del TGEV, lo que sugiere posibles diferencias entre la replicación en cis y en trans.

    Con el objetivo de estudiar los requerimientos para la replicación autónoma del RNA del TGEV, se ha generado una colección de replicones cuya actividad fue dependiente de la proteína N viral, aportada tanto en cis como en trans, asignando por primera vez un papel en síntesis de RNA a una proteína estructural codificada fuera del gen de la replicasa. Asimismo, se ha demostrado que los replicones generados constituyen vectores virales bioseguros, con capacidad de expresión eficiente de genes heterólogos.

    Con el fin de identificar los posibles componentes del complejo de replicación, se ha realizado por primera vez un análisis exhaustivo, mediante proteómica, de las proteínas virales y celulares que interaccionan con los extremos del genoma del TGEV, donde residen las señales de replicación. Se han identificado mediante espectrometría de masas 30 proteínas virales y celulares que interaccionan con los extremos del genoma, incluyendo factores esenciales para la replicación de coronavirus. Las proteínas hnRNP A1, hnRNP A2/B1 y PABP mostraron una unión preferencial por el extremo 3' del genoma. Se ha observado que los extremos del genoma interaccionan in vitro en presencia de proteínas celulares, y se ha postulado la circularización del genoma como una etapa durante la replicación.