Regulación de la expresión del gen de procolágeno alfa1(I) en respuesta al TGF-1 en células estelares hepáticas
- Autores: Elena Ruiz García Trevijano
- Directores de la Tesis: Marcos Rojkind (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 1997
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Juan Emilio Feliu Albiñana (presid.), María Jesús López Zabalza (secret.), José María Mato de la Paz (voc.), Josefa Predestinación García Ruiz (voc.), José Antonio Solís Herruzo (voc.)
- Materias:
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- Resumen
El TGF-BETA es una de las principales citoquinas fibrogénicas en el hígado. Esta citoquina induce la producción de H2O en otros tipos celulares, sugiriendo la posible participación de este agente como mediador de su mecanismo de acción sobre la expresión del gen de procolágeno alfa1 (I) murino (collal).
El TGF-BETA indujo la expresión de RNAm de collal en un cultivo de células estelares hepáticas procedentes de rata cirrótica (CFSC-2G). El agente antioxidante PDTC y la catalasa bloquearon el efecto de la citoquina sobre la expresión del collal y por otra parte el H2O2 reprodujo el efecto del TGF-BETA sobre la expresión del collal. Se determinó la posible participación de los factores nucleares NFkB y C/EBPBETA en la regulación de la expresión del collal en respuesta al TGF-BETA. El análisis de las proteínas nucleares mediante geles de retardo mostró la activación del C/EBPBETA inducida por el TGF-BETA, pero no del NFkB. Entre todos los miembros que componen la familia de factores C/EBP se identificó a C/EBP-BETA como el factor activado por TGF-BETA. El tratamiento con H2O2 indujo igualmente la activación del C/EBP-BETA; el NFkB, en cambio no resultó activado. Por otra parte el PDTC y la catalasa bloquearon la activación del C/EBP-BETA inducida tanto por el TGF-BETA como por el H2O2. Para determinar el elemento de respuesta al TGF-BETA en el promotor del collal, se realizaron estudios de transactivación mediante ensayos CAT utilizando distintos fragmentos del promotor de COL-1 murino obtenidos por PCR, clonados en el vector pCAT-basic. Dichos vectores contenían el promotor mínimo de -220 a + 110 pb (PCR1CAT), un fragmento de -220 a -407 pb (PCR2CAT) y un tercer vector con ambas secuencias de -407 a + 110 pb (PCR3CAT). Se observó transactivación del gen inducida por TGF-BETA o por H2O2 tan sólo cuando se utilizó el vector que contenía el fragmento de promotor de collal de -407 a +110 pb, revelando c
