Resumen de Propiedades mecánicas de la cápsida del virus de la enfermedad hemorrágica del conejo. Análisis mutacional para su optimización como nanoplataforma
Las partículas similares a virus (VLP) son complejos de proteínas que mimetizan la geometría bien definida de los virus, pero que carecen de material genético. Son inmunógenos excepcionales y seguros que combinan una naturaleza altamente ordenada y particulada con la falta de capacidad de propagación. Las VLPs derivadas del virus de la enfermedad hemorrágica del conejo (RHDV) representan una plataforma vacunal prometedora que ha demostrado capacidad de inducir una respuesta inmune protectora dirigida frente a epítopos diana incorporados en su superficie. El objetivo general de esta tesis fue ampliar la caracterización de esta plataforma vacunal para extender sus aplicaciones potenciales, explorando nuevos aspectos relevantes. En primer lugar, se evaluó la posibilidad de utilizar las VLPs de RHDV como plataforma para desarrollar vacunas multivalentes eficientes. Para ello, se generaron VLPs quiméricas bivalentes, que presentaban simultáneamente dos epítopos B de interés diferentes expuestos en su superficie, así como las VLPs quiméricas monovalentes correspondientes. La inmunogenicidad de las VLPs se evaluó en ratón. Los resultados obtenidos muestran que las VLPs quiméricas bivalentes indujeron una potente y equilibrada respuesta humoral específica frente a ambos epítopos diana, si bien se observó una ligera reducción en los títulos de anticuerpos específicos inducidos para cada epítopo en comparación con las VLPs quiméricas monovalentes correspondientes. Por otro lado, se caracterizaron las propiedades mecánicas de viriones y VLPs de RHDV mediante microscopía de fuerzas atómicas (AFM). A continuación, aplicando mutagénesis dirigida, se analizó la influencia de los residuos cargados presentes en el extremo N-terminal de la proteína cápsida, sobre las propiedades mecánicas. Este trabajo permitió seleccionar VLPs optimizadas con estabilidad mecánica incrementada. Finalmente, se realizó un trabajo de caracterización de las VLPs optimizadas consistente en evaluar: i) su inmunogenicidad; ii) su funcionalidad como plataforma mejorada de presentación antigénica; iii) la aplicabilidad de las modificaciones seleccionadas a VLPs derivadas de otros lagovirus (como el RHDV2, prevalente en la actualidad) para su estabilización. En conjunto, los resultados obtenidos muestran el potencial de las VLPs de RHDV como plataforma para el desarrollo de vacunas multivalentes, así como una mejora de las propiedades inmunogénicas de las VLPs optimizadas respecto a las originales. Esto las convierte en candidatas ideales para el desarrollo de nanodispositivos biotecnológicos y vacunas
