Resumen de Interacciones funcionales del complejo DNA polimerasa/proteína terminal del bacteriófago ²29

Cristina Garmendia Mendizábal

• Los obetivos de este trabajo se han centrado en el estudio de las interacciones moleculares, tanto proteina-proteina, como proteina-dna, que tienen lugar en la reaccion de iniciacion, y posteriores etapas de la replicacion del dna del bacteriofago 029. Asimismo, se ha realizado un estudio sobre la naturaleza y especificidad del enlace que se establece entre la proteina terminal y el primer nucleotido, de amp, aobrdando el problema con la construccion de mutantes puntuales en la proetina terminal. Estudios sobre la funcionalidad del complejo dna polimerasa/proteina terminal, asi como la gran estabilidad del mismo, han indicado que su formacion constituye el primer paso en la relacion de iniciacion de la replicacion. Se ha podido ver que el dominio de la dna polimerasa implicado en dicha reaccion esta protegido por la interaccion con la proteina terninal, no pareciendo existir otros dominio que intervengan directamente en un reconocimiento del origen de replicacion. Esta dna polimerasa es capaz de catalizar la formacion del complejo de iniciacion utilizando como molde dna de cadena sencilla e incorporando el nucleotido complementario al de la cadena molde. Su actividad exonucleasa 3'-05' cumple todos los requisitos de una actividad correctora de pruebas, utilizando como sustrato dna de cadena sencilla y degradando preferentemente los nucleotidos mal apareados. Ambas actividades polimerasa y exonucleasa de la dna polimerasa de 029 se encuentran acopladas corrigiendose un pequeño porcentaje de los extremos bien apareados previamente a la reaccion de polimedizacion. Ademas, la iniciacion de la elongacion, reaccion catalizada por esta dna polimerasa requiere que el extremo del iniciador este correctamente apareado por ultimo, puede concluirse el enlace entre la proteina terminal y el primer nucleotido damp, es altamente especifico, no pudiendo sustituirse el residuo de serina implicado por uno de treonina y detectandose una pequeña ac