Caracterización de la actividad RdRp y estudio de la interacción con factores celulares de la proteína NS5 de Flavivirus
- Autores: Laura Albentosa González
- Directores de la Tesis: Antonio Mas López (dir. tes.), Pilar Clemente Casares (codir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Castilla-La Mancha ( España ) en 2022
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Juana Díez Antón (presid.), Laura Benítez Rico (presid.), Ursula Höfle (secret.), Ricardo Sánchez Prieto (secret.), Núria Verdaguer Massana (voc.), Miguel Ángel Martínez de la Sierra (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Ciencias de la Salud por la Universidad de Castilla-La Mancha
- Materias:
- Enlaces
- Tesis en acceso abierto en: RUIdeRA
- Resumen
Los virus de la familia Flaviviridae son responsables de distintos tipos de enfermedades que incluyen hepatitis, síndromes neurológicos, fiebres hemorrágicas, etc. Esta familia comprende cuatro géneros: Flavivirus, Pestivirus, Hepacivirus y Pegivirus.
En esta Tesis Doctoral se han clonado las proteínas NS5 y el dominio con actividad RdRp en vectores de expresión en bacterias y en células de mamífero las regiones correspondientes a tres flavivirus: Usutu, West Nile y Zika.
Los plásmidos de expresión en bacterias han permitido la sobreexpresión y purificación de las proteínas recombinantes. Esto nos ha permitido estudiar la actividad RdRp in vitro de estas proteínas y finalmente analizar si in vitro éstas son fosforiladas por Akt y determinar cuáles son los residuos que se fosforilan.
Los plásmidos de expresión en células eucariotas nos han permitido expresar en cultivos celulares las proteínas virales y estudiar si in vivo interaccionan con Akt. Estos plásmidos también nos han permitido estudiar localización subcelular de las proteínas. Adicionalmente se han llevado a cabo experimentos de infección con diferentes tratamientos que permiten inhibir Akt para intentar esclarecer los efectos de la quinasa celular Akt sobre la actividad replicante de estas enzimas virales y su papel en la modulación de la replicación de los virus de la familia Flaviviridae.
Nuestros resultados sugieren que las proteínas NS5 de los flavivirus podrían ser objeto de modificaciones postraduccionales impulsadas por Akt, y cuyos objetivos podrían ser la modulación de la actividad ARN-polimerasa o desempeñar un papel regulador en el ciclo replicativo del virus. La caracterización de esta interacción arrojará luz sobre la interacción del virus con la célula hospedadora y su efecto en la replicación viral.
