Caracterización de la unión RNA al conector del bacteriófago ¢29

• Autores: Cristina Mier Buergo
• Directores de la Tesis: José López Carrascosa (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 1996
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Miguel Hermoso Jose (presid.), José María Almendral del Río (secret.), Maria Carazo Jose (voc.), Maria Antonia Martin Gallardo (voc.), José M. Valpuesta (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
      • Proteínas
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• Resumen

  • En este trabajo de tesis se ha caracterizado un sistema de empaquetamiento de dna in vitro basado en precabezas virales hibridas lambda/029. Este sistema funcional empaqueta distintos dnas sustratos y es estrictamente dependiente de la presencia en el medio de rna. Por analisis comparativos de secuencias se comprobo que la proteina p10, que forma el conector de las precabezas, pertenece a una familia de proteinas que unen rna. En base a estos estudios, decidimos caracterizar este dominio. Realizamos modelado tridimensional basado en homologia del posible dominio de union a rna de la proteina p10; realizamos tambien una simulacion de la union de este dominio a una molecula de rna. Una vez definidos cuales eran los aminoacidos que parecian criticos para la union del rna y que ademas estan conservados en otros dominios de union a rna de otras proteinas, realizamos mutagenesis dirigida para caracterizar a fondo la funcion de estos residuos. Se obtuvieron los mutantes y se estudio tanto su capacidad de union a acidos nucleicos como su comportamiento en el sistema funcional de empaquetamiento. Obtuvimos igualmente modelos tridimensionales para cada uno de los mutantes. De esta forma, se ha caracterizado la existencia de un dominio de un union a rna en la proteina que forma el conector del bacteriofago 029 existen una serie de aminoacidos que son criticos para la union del rna por parte de los conectores aislados; tambien hemos definido que el rna tiene que unirse, no ya con una determinada afinidad, sino a traves de aminoacidos especificos, a las precabezas virales para que estas sean funcionales en el empaquetamiento de dna. Tambien hemos estudiado los papeles que juegan en el sistema de empaquetamiento los dnas y rnas sustratos.