Interaction of calmodulin with members of the ErbB receptor family and the Grb7 adaptor protein

• Autores: Hongbing Li
• Directores de la Tesis: Antonio Villalobo Polo (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2003
• Idioma: inglés
• Tribunal Calificador de la Tesis: Carles Enrich Bastús (presid.), José Martín Nieto (secret.), Jorgina Satrústegui Gil-Delgado (voc.), Francisco Javier Díez Guerra (voc.), Atanasio Pandiella Alonso (voc.)
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• Resumen

  • El receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR) es una tirosina quinasa que pertenece, junto con otros tres miembros relacionados, a la familia de receptores ErbB. Estos receptores fosforilados y activados generan una serie de eventos de señalización dirigidos a iniciar proliferación celular, diferenciación, migración celular y/o reaciones antiapoptoticas.

    En esta Tesis, mostramos que la calmodulina (CaM) en presencia de Ca2+ forma parte de un complejo de alto peso molecular formado después del entrecruzamiento covalente del EGFR humano inmunoprecipitado de células de carcinoma epidermoide humano A431 y fibroblastos murinos EGFR-T17 que sobreexpresan el receptor humano. Hemos demostrado usando técnicas de hibridación que la CaM biotinilada se une directamente al receptor de una manera dependiente de Ca2+ sin la mediación de proteínas adaptadoras dependiente de CaM. La CaM se une al EGFR con una constante de disociación aparente (K'd) de aproximadamente 0.17-0.5 uM. También se presentan evidencias de la co-inmunoprecipitación de la CaM con el EGFR. Además, hemos demostrado en células SK-BR-3 de adenocarcinoma de mama humano que el receptor ErbB2, otro miembro de esta familia, también une directamente CaM en presencia, pero no en ausencia de Ca2+.

    Grb7 es un miembro de una familia de proteínas adaptadoras que incluyen Grb7, Grb10 y Grb14, que se unen a través de su dominio SH2 a receptores tirosina quinasa. Recientemente, varias evidencias indican que Grb7 y su variante Grb7V, que carece del dominio SH2, están involucradas en migración celular. Utilizando cromatografía de afinidad a la CaM hemos demostrado que Grb7 de células SK-BR-3 se une a CaM-agarosa. Overlay de Grb7 y Grb7V recombinantes con CaM biotinilada indica que su interacción es directa y dependiente de Ca2+.

    Determinamos que la K'd de CaM por Grb7 es aproximadamente de 30 nM. Se identificó una secuencia aminoacídica anfifílica básica que