Resumen de Caracterización funcional del promotor del gen humano TIMM23

Jesús Ángel Prieto Ruiz

• El trabajo describe la caracterización funcional del promotor del gen humano que codifica la proteína TIMM23 (Translocase of Inner Mitochondrial Membrane), principal componente del complejo de transporte interno mitocondrial TIM23 y responsable de la internalización de proteínas con destino a la matriz mitocondrial. En el análisis de la secuencia promotora del gen se identificaron cuatro elementos de unión para GABP (GA Binding Protein) también conocidos como NRF-2 (Nuclear Respiratory Factor) y uno para RBPJ-Kappa. La funcionalidad de dichos factores transcripcionales se demostró mediante análisis de expresión de luciferasa, mutagénesis dirigida de los distintos sitios de unión, ensayos de retraso de la movilidad electroforética (EMSA), donde se puso de manifiesto la formación de complejos de unión ADN-proteína y ensayos de Inmunoprecipitación de Cromatina (ChIP). También se realizó un estudio de la conservación de los sitios de unión NRF-2 y RBP-JKappa identificados, en las secuencias homólogas de TIMM23 de otras especies animales. Tras el análisis de los resultados se llegaron a las siguientes conclusiones: -La región promotora del gen humano TIMM23 no contiene cajas TATA, ni CCAAT y presenta dos islas CpG. Éstas son características típicas de los promotores de genes que codifican proteínas mitocondriales.

  -El gen humano TIMM23 comparte su región promotora con el gen PARG, y ésta se comporta como un promotor bidireccional dirigiendo la expresión de ambos genes.

  -Se ha identificado la región comprendida entre las posiciones -160/+100 del gen TIMM23 como la de mayor actividad promotora.

  -La región promotora contiene cuatro sitios funcionales de unión a NRF-2: NRF-2A, NRF-2B, NRF-2C y NRF-2D.

  -NRF-2A es el sitio clave para la regulación de la expresión génica de TIMM23.

  -NRF-2B contribuye minoritariamente a la máxima expresión de TIMM23 y sólo en presencia de los otros tres sitios a NRF-2 identificados.

  -NRF-2C y NRF-2D cooperan entre ellos en la regulación de la expresión deTIMM23 y actúan sinérgicamente con NRF-2A.

  -Se ha identificado la presencia de un sitio de unión para RBP-JKappa a -567 pb del inicio de la transcripción que actúa como un inhibidor de la expresión de TIMM23.