Capacidad antioxidante del liver growth factor estudios in vitro e in vivo en ratas espontáneamente hipertensas

• Autores: Cristina Susín Lara
• Directores de la Tesis: Silvia Magdalena Arribas Rodríguez (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2008
• Idioma: español
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• Resumen

  • ÍNDICE ÍNDICE ÍNDICE Página ABREVIATURAS ..................................................................................................... i RESUMEN ............................................................................................................. iii INTRODUCCIÓN .....................................................................................................1 I. LIVER GROWTH FACTOR...................................................................................2 1. EFECTOS BIOLÓGICOS DEL LIVER GROWTH FACTOR..........................3 2. NATURALEZA QUÍMICA DEL LIVER GROWTH FACTOR ..........................5 3. ALBÚMINA ....................................................................................................6 4. BILIRRUBINA................................................................................................8 5. CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE LA ALBÚMINA Y DE LA BILIRRUBINA..9 II. ESTRÉS OXIDATIVO .........................................................................................10 1. ESPECIES REACTIVAS DE OXÍGENO Y NITRÓGENO.............................11 1.1. Principales especies reactivas de oxígeno y nitrógeno..........................12 1.2. Fuentes de especies reactivas de oxígeno ............................................17 2. FUNCIONES FISIOLÓGICAS DE LAS ESPECIES REACTIVAS DE OXÍGENO.....................................................................................................18 3. EFECTOS NOCIVOS DE LAS ESPECIES REACTIVAS DE OXÍGENO......19 4. SISTEMAS DE DEFENSA ANTIOXIDANTE ................................................22 4.1. Sistemas de defensa antioxidante no enzimáticos.................................23 4.2. Sistemas de defensa antioxidante enzimáticos......................................27 III. HIPERTENSIÓN ARTERIAL..............................................................................29 1. MODELO ANIMAL DE HIPERTENSIÓN ESENCIAL ...................................33 IV. ESTRÉS OXIDATIVO E HIPERTENSIÓN ARTERIAL ......................................34 1. PRODUCCIÓN DE RADICALES LIBRES EN LA PARED VASCULAR .......34 2. DAÑO PRODUCIDO POR LOS RADICALES LIBRES EN LA PARED VASCULAR .................................................................................................39 3. TRATAMIENTO ANTIOXIDANTE DE LA HIPERTENSIÓN .........................42 ÍNDICE OBJETIVOS............................................................................................................45 1. HIPÓTESIS ..................................................................................................46 2. OBJETIVOS .................................................................................................46 MATERIALES Y MÉTODOS...................................................................................48 I. PURIFICACIÓN DEL LGF....................................................................................49 II. ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN Y TRATAMIENTO...................................49 III. EXTRACCIÓN Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS..........................................50 1. OBTENCIÓN DE PLASMA PARA DETERMINACIONES BIOQUÍMICAS....50 2. OBTENCIÓN DE TEJIDO ARTERIAL Y CULTIVOS PRIMARIOS DE CÉLULAS MUSCULARES LISAS ................................................................51 IV. DETERMINACIÓN DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE IN VITRO................55 1. REACTIVOS Y DISOLUCIONES .................................................................55 2. EQUIPOS .....................................................................................................56 3. MÉTODO DEL ABTS....................................................................................56 4. MÉTODO ORAC-FL .....................................................................................57 5. MÉTODO DE LA DESOXIRRIBOSA............................................................58 6. MÉTODO DEL LUMINOL.............................................................................59 V. DETERMINACIÓN DE LOS NIVELES BASALES DE RADICAL ANIÓN SUPERÓXIDO Y DE LA ACTIVIDAD NAD(P)H OXIDASA................................60 1. REACTIVOS Y DISOLUCIONES..................................................................60 2. EQUIPOS .....................................................................................................60 3. MÉTODO DE LA LUCIGENINA....................................................................61 4. MÉTODO DEL DIHIDROETIDIO..................................................................62 4.1. Para arterias mesentéricas de resistencia..............................................62 4.2. Para células musculares lisas ................................................................65 VI. DETERMINACIÓN DEL SISTEMA DE DEFENSA ANTIOXIDANTE ENDÓGENO GLUTATIÓN EN PLASMA ...........................................................66 1. REACTIVOS Y DISOLUCIONES..................................................................66 2. EQUIPOS .....................................................................................................66 3. MÉTODO DTNB...........................................................................................67 4. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD GLUTATIÓN REDUCTASA............68 ÍNDICE VII. MEDIDAS DE ESTRÉS OXIDATIVO EN PLASMA ..........................................69 1. REACTIVOS Y DISOLUCIONES..................................................................69 2. EQUIPOS .....................................................................................................69 3. MÉTODO TBARS .........................................................................................69 VIII. ENSAYOS DE FUNCIÓN VASCULAR EN ARTERIAS AISLADAS.................70 1. REACTIVOS Y DISOLUCIONES..................................................................70 2. EQUIPOS .....................................................................................................71 3. MEDIDA DE LA FUNCIÓN VASCULAR MEDIANTE REGISTRO DE LA TENSIÓN ISOMÉTRICA...............................................................................71 4. DETERMINACIÓN DE LA BIODISPONIBILIDAD BASAL DE ÓXIDO NÍTRICO MEDIANTE DAF2-DA ...................................................................74 IX. ANÁLISIS ESTADÍSTICO..................................................................................76 RESULTADOS........................................................................................................77 I. CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DEL LGF IN VITRO.............................................78 1. CAPACIDAD PARA ELIMINAR EL RADICAL CATIÓN ABTS......................78 2. CAPACIDAD PARA ELIMINAR EL RADICAL PEROXILO ..........................82 3. CAPACIDAD PARA ELIMINAR EL RADICAL HIDROXILO..........................85 4. CAPACIDAD PARA ELIMINAR EL RADICAL ANIÓN SUPERÓXIDO .........88 II. EFECTO DEL TRATAMIENTO DE RATAS SHR CON LGF SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA NAD(P)H OXIDASA Y SOBRE LA PRODUCCIÓN DEL RADICAL ANIÓN SUPERÓXIDO.....................................90 1. ACTIVIDAD NAD(P)H OXIDASA..................................................................90 2. CUANTIFICACIÓN DEL RADICAL ANIÓN SUPERÓXIDO..........................92 III. REDUCCIÓN DEL ESTRÉS OXIDATIVO POR EL TRATAMIENTO DE RATAS SHR CON LGF...................................................................................................96 1. PEROXIDACIÓN LIPÍDICA ..........................................................................96 2. PROTECCIÓN DEL ÓXIDO NÍTRICO FRENTE A ESPECIES REACTIVAS DE OXÍGENO...............................................................................................96 IV. EFECTO DEL TRATAMIENTO DE RATAS SHR CON LGF SOBRE EL SISTEMA DE DEFENSA ANTIOXIDANTE ENDÓGENO GLUTATIÓN............100 1. CUANTIFICACIÓN DEL GLUTATIÓN TOTAL.............................................100 2. ACTIVIDAD GLUTATIÓN REDUCTASA .....................................................101 ÍNDICE DISCUSIÓN ...........................................................................................................102 I. CAPACIDAD DEL LGF PARA ELIMINAR RADICALES LIBRES EN MEDIO ACUOSO...........................................................................................................106 II. EFECTO IN VIVO DEL LGF ..............................................................................112 1. PRODUCCIÓN DE RADICAL ANIÓN SUPERÓXIDO.................................113 2. EFECTO DEL TRATAMIENTO DE RATAS SHR CON LGF SOBRE EL SISTEMA DE DEFENSA ANTIOXIDANTE GLUTATIÓN ...........................117 III. REDUCCIÓN DEL DAÑO PRODUCIDO POR ESTRÉS OXIDATIVO POR EL TRATAMIENTO DE RATAS SHR CON LGF ..................................................118 IV. PROTECCIÓN DEL ÓXIDO NÍTRICO FRENTE A RADICALES LIBRES DE OXÍGENO ......................................................................................................119