Regulación de la neurotransmisión por receptores nicotínicos

• Autores: Juan José Arnáiz Cot
• Directores de la Tesis: Antonio García García (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2008
• Idioma: español
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• Resumen

  • INTRODUCCIÓN ..................................................................................... 6 1.-LOS RECEPTORES NICOTÍNICOS NEURONALES ................................... 7 1.1.-Subtipos de receptores nicotínicos neuronales ............................................ 7 1.2.-Funciones fisiológicas de los receptores nicotínicos neuronales ................. 8 1.3.-Localización de los receptores nicotínicos neuronales................................10 1.3.1.-Receptores nicotínicos presinápticos ............................................ 10 1.3.2.-Receptores nicotínicos axonales .................................................... 11 1.3.3.-Receptores nicotínicos postsinápticos ........................................... 12 1.4.-Receptores nicotínicos y señales intracelulares de calcio ......................... 14 2. LA CÉLULA CROMAFÍN DE LA MÉDULA SUPRARRENAL ................. 15 2.1.-Las glándulas suprarrenales ....................................................................... 16 2.2.-La célula cromafín como modelo celular .................................................. 17 2.3.-Los receptores nicotínicos neuronales de la célula cromafín .................... 18 3.-EL HIPOCAMPO ............................................................................................... 19 3.1.-Estructura del hipocampo .......................................................................... 21 3.2.-Receptores nicotínicos neuronales en el hipocampo ................................. 22 4.-LIGANDOS NICOTÍNICOS ............................................................................. 24 HIPÓTESIS Y OBJETIVOS ................................................................. 27 MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................... 31 1. AISLAMIENTO Y CULTIVO DE CÉLULAS CROMAFINES BOVINAS................................................................................ 32 2.-AISLAMIENTO Y CULTIVO DE NEURONAS DE HIPOCAMPO DE RATA ................................................................................. 34 3.-REGISTRO DE CORRIENTES IÓNICAS MEDIANTE LA TÉCNICA DE PATCH-CLAMP ................................................................ 36 4.- MEDIDA DE LA EXOCITOSIS MEDIANTE EL ESTUDIO DE LA VARIACIÓN DE LA CAPACIDAD ELÉCTRICA DE LA MEMBRANA CELULAR (¿Cm) .............................. 39 5.- MEDIDA DE LA EXOCITOSIS CON TÉCNICAS AMPEROMÉTRICAS ...................................................................................... 40 6.-INMUNOTRANSFERENCIA ("Western-blot") ............................................. 41 Índice - ii - 7.-SOLUCIONES EXPERIMENTALES EMPLEADAS .................................. 42 7.1.-Registros en células cromafines bovinas ....................................................42 7.2.-Registros en neuronas de hipocampo de rata ............................................43 7.3.-Ligandos nicotínicos .................................................................................. 44 8.-ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS RESULTADOS ................................... 44 RESULTADOS ........................................................................................ 45 1.- MODULACIÓN POR ACETILCOLINA DE LA LIBERACIÓN DE CATECOLAMINAS POR CÉLULAS CROMAFINES BOVINAS ............................................................46 1.1.-La acetilcolina modula la ICa y la secreción de catecolaminas ............................................................................................48 1.2.-Naturaleza nicotínica de la modulación por ACh .......................................52 1.3.-Efecto de otros agonistas del receptor nicotínico .......................................55 1.4.-La potenciación de la secreción inducida por ACh es dependiente de calcio ...............58 2.- MODULACIÓN DE LA NEUROTRANSMISIÓN EN CULTIVOS DE HIPOCAMPO DE RATA ..................................................... 61 2.1.-La expresión del receptor ¿7 varía en función de los días en cultivo de las neuronas de hipocampo.......................................... 61 2.2.-Aumento de la transmisión sináptica inducida por colina ........................................................................................................ 63 2.3.-Potenciación de la transmisión sináptica inducida por colina por el modulador alostérico ¿7 5-OH-indol ................................. 65 2.4.-El antagonista nicotínico MLA bloquea la respuesta inducida por colina ................................................................................... 67 2.5.-Localización presináptica del receptor ¿7 ................................................. 69 2.6.-La bicuculina suprime el efecto modulador de la estimulación del receptor nicotínico ¿7, cosa que no hace el ácido kinurénico .......................................................................... 71 2.7.-La bicuculina y el ácido kinurénico bloquean las corrientes nicotínicas ¿7 .......................................................................... 74 2.8.-El receptor nicotínico ¿7 puede inducir también una supresión de la activación sináptica en el hipocampo ............................. 76 3.- CULTIVOS DE NEURONAS DE HIPOCAMPO DE RATA COMO MODELO EXPERIMENTAL PARA EL DESARROLLO DE NUEVOS LIGANDOS NICOTÍNICOS .......................... 78 3.1.-Modificaciones metodológicas para la selección de las corrientes GABAérgicas .......................................................................... 78 3.2.-Modulación nicotínica de la transmisión sináptica GABAérgica por nuevos moduladores alostéricos del receptor nicotínico ................................................................................... 81 Índice - iii - DISCUSIÓN ............................................................................................. 83 1.-MODULACIÓN POR RECEPTORES NICOTÍNICOS DE LA LIBERACIÓN DE CATECOLAMINAS ADRENOMEDULARES ...................................................................................... 85 1.1.-La estimulación nicotínica reduce la ICa y potencia la exocitosis ................................................................................................. 85 1.2.-La potenciación de la exocitosis depende de la entrada de Ca2+ por el receptor nicotínico ............................................................ 86 1.3.-Un modelo que explica el papel dual de la acetilcolina ............................ 87 2.- MODULACIÓN DE LA NEUROTRANSMISIÓN EN CULTIVOS DE NEURONAS DE HIPOCAMPO DE RATA ..................... 89 2.1.-La activación de los receptores ¿7 aumenta la liberación de GABA ................................................................................ 89 2.2.-Ubicación presináptica y/o axonal de los receptores ¿7 ........................... 91 2.3.-Supresión "paradójica" de la actividad sináptica en el hipocampo por estimulación de los receptores nicotínicos ................................................................................................ 91 3.-EL CULTIVO DE NEURONAS DE HIPOCAMPO COMO MODELO PARA EL DESARROLLO DE NUEVOS LIGANDOS NICOTÍNICOS ............................................................................... 92