Role of N-Ras in murine models of liver fibrosis

• Autores: Xiao-Kang Zheng
• Directores de la Tesis: Edgar Fernández Malavé (dir. tes.), Francisco Javier Cubero Palero (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 2021
• Idioma: inglés
• Número de páginas: 134
• Títulos paralelos:
  • Papel de N-Ras en modelos múridos de fibrosis hepática
• Tribunal Calificador de la Tesis: José Manuel Martín Villa (presid.), Ana Victoria Marín Marín (secret.), Ana Blas García (voc.), Francisco Javier Vaquero Martin (voc.), Matthias Bartneck (voc.)
• Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Investigación Biomédica por la Universidad Complutense de Madrid
• Materias:
  • Ciencias médicas
    • Medicina interna
      • Gastroenterología
    • Patología
      • Patología experimental
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Docta Complutense
• Resumen
  • español

    Introducción Los genes Ras (H-Ras, K-Ras y N-Ras) codifican las proteínas RAS con funciones fundamentales en la regulación de la supervivencia, diferenciación, crecimiento y apoptosis celular. Aparte de sus propiedades oncogénicas, se sabe poco sobre el contexto y las funciones patofisiológicas dependientes de las células de las proteínas RAS. En particular, N-Ras participa de manera crítica en la función de las células inmunes. La fibrosis hepática se desarrolla en respuesta a citocinas inflamatorias, interacciones celulares con células inmunes y señales morfogénicas. En el presente trabajo, planteamos la hipótesis de que N-Ras juega un papel fundamental en la fisiopatología de la fibrosis hepática.

    Métodos Los ratones deficientes en N-Ras (N-Ras - /-) y de tipo salvaje (N-Ras +/+) criados en un fondo C57BL/6 se sometieron a la inducción de fibrosis periportal o peribiliar utilizando (i) tratamiento crónico con CCl4 y (ii) ligadura de conductos biliares (BDL), respectivamente. Se incluyeron como controles ratones inyectados con aceite y operados de forma simulada. Veintiocho días después, se sacrificaron los ratones y se recogió y analizó tejido hepático. Se realizaron exámenes histopatológicos de secciones de hígado, inmunofluorescencia (IF) e inmunohistoquímica (ICH), Western Blot y estudios en tiempo real (RT) -qPCR y análisis de matriz de genes.

    Resultados El examen histopatológico de secciones de hígado de ratones N-Ras-/- mostró una mayor presencia de focos necróticos asociados con marcadores significativamente elevados de daño hepático en suero en comparación con N-Ras+/+, 28 días después de CCl4 o BDL. Los hígados N-Ras-/- mostraron un aumento de la muerte celular y marcadores de proliferación celular compensatoria, como PCNA y Ki-67. Además, las células F4-80+ y CD45+ aumentaron significativamente en los animales N-Ras-/- en comparación con los animales N-Ras+/+. Además, la deposición de colágeno I y III y la expresión de ARNm y proteína de ¿-actina de músculo liso (¿SMA) se elevaron significativamente en ratones N-Ras-/-. Mecánicamente, los hígados N-Ras-/- mostraron una activación aumentada de la caspasa 8 escindida (CC8), la serina / treonina quinasa que interactúa con el receptor fosforilado 1/3 (pRIPK1/3) y el dominio de quinasa de linaje mixto fosforilado como la pseudoquinasa (pMLKL), junto con una disminución Caspasa-3 escindida. Además, la deficiencia de N-Ras desencadenó la sobreexpresión de serina / treonina-proteína quinasa fosforilada (pAKT) y quinasas N-terminales c-Jun fosforiladas 1/2 (pJNK1/2). Finalmente, el análisis de la matriz de genes mostró que N-Ras juega un papel fundamental en la modulación de la fibrosis.

    Conclusiones Tras el tratamiento crónico con CCl4 o BDL, la deficiencia de N-Ras se asoció con un aumento de la muerte celular escindida de caspasa 8, RIPK1/3 y pMLKL, una proliferación compensadora exacerbada, un aumento de la inflamación y la infiltración de células inmunitarias y, en última instancia, fibrosis hepática. Estos hallazgos indican que N-Ras podría desempeñar un papel fundamental en el inicio y progresión de la fibrosis hepática. Además, sugieren que la modulación de la señalización de N-Ras podría ser un nuevo enfoque terapéutico para el tratamiento de la lesión hepática crónica.

  • English

    The Ras genes (H-Ras, K-Ras and N-Ras) encode for the RAS proteins with pivotal roles in the regulation of cell survival, differentiation, growth and apoptosis. Apart from their oncogenic properties, little is known on the context and cell-dependent pathophysiological roles of RAS proteins. In particular, N-RAS is critically involved in immune cell function. Hepatic fibrogenesis develops in response to inflammatory cytokines, cellular interactions with immune cells and morphogenic signals. In the present work, we hypothesized that N-Ras plays a pivotal role in the pathophysiology of liver fibrogenesis...