Estudio de la regulación de la ruta de degradación del ácido 3-hidroxifenilpropiónico en Escherichia coli y sus aplicaciones para el desarrollo de nuevos sistemas de contención activa de microorganismos
- Autores: Begoña Torres Belinchón
- Directores de la Tesis: Eduardo Díaz Fernández (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2002
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Ricardo Amils Pibernat (presid.), José Berenguer Carlos (secret.), Víctor de Lorenzo Prieto (voc.), Manuel Espinosa Padrón (voc.), Julian Perera (voc.)
- Materias:
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- Resumen
En esta tesis se han estudiado los elementos reguladores de la transcripción del "cluster" mhp de Escherichia coli para la degradación del ácido 3-hidroxifenilpropiónico.
Se han descrito los dos promotores divergentes de esta ruta, Pa y Pr. El activador específico de esta ruta, MhpR, es una proteína capaz de unirse in vitro al promotor Pa. Los compuestos aromáticos capaces de inducir la ruta mhp son 3-hidroxifenilpropiónico (3 HPP), 3-hidroxicinámico (3HCI) y 3-dihidroxifenilpropiónico (DHPP). La activación del promotor Pa esta sometida a represión catabólica por glucosa mediada por el complejo CRP-AMPc.
El producto del gen mhpT, la proteína MhpT, es un transportador de 3HPP en Escherichia coli.
Se ha demostrado en esta tesis que el sistema de metilación-restricción EcoRI es un sistema idóneo para diseñar circuitos de contención genética en Proteobacterias y mediante la combinación de este sistema con los elementos reguladores MhpR/Pa de la ruta de degradación del 3HPP, se ha desarrollado el primer circuito de contención biológica basado en un sistema de toxina/antídoto que responde a la presencia/ausencia de 3HPP. Además, se ha diseñado por primera vez un circuito dual basado en la combinación de funciones letales distintas (endonucleasa EcoRI y colicina E3), con dianas celulares diferentes (ADN y ARNr) y bajo controles independientes y se ha demostrado que este circuito reduce significativamente la frecuencia de transferencia de un gen marcador flanqueado por las dos funciones letales.
