Papel diferencial de NFATc1 y NFATc3 en la regulación de genes implicados en la activación de linfocitos T y en angiogénesis

• Autores: Katia Urso
• Directores de la Tesis: Juan Antonio Márquez Rodríguez (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2012
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Manuel Fresno Escudero (presid.), Miguel Ángel Íñiguez Peña (secret.), Susana de la Luna Gargantilla (voc.), Ángel Luis Armesilla Arpa (voc.), José Francisco Aramburu Beltrán (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología celular
    • Inmunología
    • Biología molecular
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: digitool-uam.greendata.es
• Resumen

  • ANTECEDENTES DE LA CUESTIÓN Y OBJETIVOS PROPUESTOS NFAT es una familia de factores de transcripción implicada en la regulación de la respuesta inflamatoria. Se trata de 4 miembros regulados por actividad de la Calcineurina, una fosfatasa dependiente de señales de calcio. Estudios previos dirigidos al análisis de las funciones específicas de cada proteína NFAT se han llevado a cabo en ratones deficientes. Sin embargo los datos obtenidos no han llegado a resultados concluyentes ya que las deleciones génicas no provocaron fenotipos drásticos en ratones adultos. Nuestro objetivo es demostrar que las proteínas NFAT ejercen funciones independientes regulando de manera específica un determinado set de genes. Nosotros suponemos que las proteínas NFAT contienen dominios o propiedades diferentes que justifiquen esta especificidad pero son suficientemente homologas como para compensarse durante el desarrollo embrionario.

    Puesto que la familia NFAT está implicada en activación de los linfocitos T durante un proceso de inflamación así como del endotelio en angiogénesis nos propusimos comparar el papel de dos miembros NFAT, en particular del NFATc1 y NFATc3 en la regulación de genes específicos en estos dos modelos.

    DESARROLLO DEL TRABAJO Y METODOLOGÍA Considerando que la técnica de manipulación genética de ratones no ha aclarado suficientemente las diferencias entre los miembros NFAT, decidimos usar el abordaje alternativo del RNA de interferencia. Mediante este sistema es posible disminuir la expresión de una proteína y analizar su efecto en un plazo de tiempo reducido. Nosotros diseñamos y validamos unas secuencias de silenciamiento (shRNA) para los miembros NFATc1 y NFATc3. A continuación clonamos los shRNA en lentivirus e, infectando células T así como células endoteliales, comparamos la expresión génica, en mRNA y proteína, de genes diana. Además se estudió el impacto del silenciamiento de los dos miembros en procesos funcionales como la proliferación y la migración.

    APORTACIONES DE CARÁCTER GENÉRICO O EXPERIMENTAL Con este estudio de tesis conseguimos demostrar que los miembros NFAT ejercen funciones independientes. NFATc1 regula negativamente la citoquina IL2 mientras que NFATc3 promueve la expresión de la IL2 y la COX2, ambos importantes moduladores de la activación de los linfocitos T. Además NFATc3 resulta necesario para la proliferación de células T. Nuestros resultados demuestran por primera vez la importancia de este miembro en la activación linfocitaria. En endotelio NFATc3 controla la expresión de la COX2 y, en consecuencia, de los prostanoides y es esencial para la migración y la proliferación. Con este trabajo hemos demostrado que NFATc3, a diferencia del NFATc1, es un importante modulador de la angiogénesis.