Optimización de las técnicas de evaluación y vitrificación de ovocitos de équidos
- Autores: Blasa Pereira
- Directores de la Tesis: Jesús Manuel Dorado Martín (dir. tes.), Manuel Hidalgo Prieto (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Córdoba (ESP) ( España ) en 2021
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Inmaculada Luque Moreno (presid.), Francisco Crespo Castejón (secret.), Manuel Álvarez Rodríguez (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Biociencias y Ciencias Agroalimentarias por la Universidad de Córdoba
- Materias:
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- Resumen
1. introducción o motivación de la tesis La crioconservación de ovocitos de équidos es la técnica de reproducción asistida más eficaz para la conservación de la diversidad genética, esencial en el caso de yeguas ganadoras de competición ecuestre, ya sea deportiva o morfológica, yeguas en peligro de extinción, o incluso tras la muerte de la yegua. Asimismo, permite aumentar la descendencia de estas yeguas que se encuentran en competición, incluso fuera de la temporada reproductiva. Sin embargo, no se ha conseguido desarrollar ninguna metodología efectiva y reproducible que permita la crioconservación comercial de ovocitos equinos. Las técnicas que crioconservación de ovocitos inmaduros equinos emplean agentes crioprotectores penetrantes, los cuales son tóxicos para el ovocito. El objetivo principal de la presente tesis consistió en optimizar las técnicas de vitrificación del ovocito de équidos evitando el uso de agentes crioprotectores.
2.contenido de la investigación En el capítulo 1 se comparó estudió el efecto de la vitrificación de ovocitos de équidos en ausencia de agentes crioprotectores penetrantes. También se comparó el grado de visibilidad de varios protocolos de tinción de la cromatina nuclear empleando sustancias fluorescentes. En el capítulo 2 se evaluó la fragmentación del ADN de las células de la granulosa, antes y después de ser cometidas a crioconservación, empleando el test de dispersión de la cromatina. Asimismo, se evaluó la relación entre la fragmentación del ADN de las células de la granulosa y la competencia meiótica de los ovocitos equinos tras ser sometidos a maduración in vitro. En el capítulo 3 se estudió el efecto de la vitrificación en ausencia de agentes crioprotectores penetrantes sobre las células del cúmulo.
3.conclusión El uso de solución de vitrificación sin agentes crioprotectores permeables no puede ser considerada una alternativa a los medios de vitrificación formados por la combinación de crioprotectores permeables y no permeables. Se recomienda emplear una concentración baja del fluorocromo HO para evaluar el estado de la cromatina nuclear de los ovocitos equinos después de ser madurados in vitro.
El uso de cualquier protocolo de crioconservación combinando diferentes temperaturas (-80ºC/-196ºC) o crioprotectores (etilenglicol y dimetilsulfóxido), preservó el ADN de las células de la granulosa de équidos del mismo modo, permitiendo su evaluación en un análisis más detallado. El test de dispersión de la cromatina (D3-MAX) ha demostrado ser un método fiable para evaluar la fragmentación de las células de la granulosa de équidos. El análisis de la fragmentación del ADN de las células de la granulosa de équidos puede ser un método valioso para identificar ovocitos equinos mostrando la mejor competencia meiótica tras ser madurados in vitro.
El uso de medios de vitrificación compuestos por sacarosa como único agente crioprotector, aumenta la tasa de fragmentación total del ADN de las células del cúmulo, pero las protege frente a la alta tasa de fragmentación del ADN durante la vitrificación de ovocitos equinos.
4. bibliografía Pereira B.; Ortiz I.; Dorado J.; Diaz-Jimenez M.; Consuegra C.; Demyda-Peyras S.; Hidalgo M., 2020: The effect of different vitrification and staining protocols on the visibility of the nuclear maturation stage of equine oocytes. J. Equine Vet. Sci., 90 103021.
Pereira B.; Ortiz I.; Dorado J.; Consuegra C.; Diaz-Jimenez M.; Demyda-Peyras S.; Gosalvez J.; Hidalgo M., 2019: Evaluation of DNA Damage of mare Granulosa Cells Before and After Cryopreservation Using Chromatin Dispersion Test. J. Equine Vet. Sci., 72 28-30.
Pereira B.; Dorado J.; Diaz-Jimenez M.; Consuegra C.; Ortiz I.; Gosalvez J.; Hidalgo M.,2019: Relationship between DNA fragmentation of equine granulosa cells and oocyte meiotic competence after in vitro maturation. Reprod Domest Anim, 54 Suppl 4 78-81.
Pereira B.; Ortiz I.; Dorado J.; Diaz-Jimenez M.; Consuegra C.; Gosalvez J.; Hidalgo M.,2019: Effect of permeable cryoprotectant-free vitrification on DNA fragmentation of equine oocyte-cumulus cells. Reprod Domest Anim, 54 Suppl 3 53-56.
