Regulación del factor de trascripción Nurr1 mediante cambios en su localización subcelular y su estabilidad por estrés oxidativo

• Autores: Ángel García Yagüe
• Directores de la Tesis: Antonio Cuadrado (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2012
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Manuela García López (presid.), Oscar Martínez-Costa Pérez (secret.), José Manuel Fuentes Rodríguez (voc.), Carlos Vicario Abejón (voc.), Maria Lopez de Ceballos Lafarga (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Biblos-e Archivo
• Resumen

  • El factor de transcripción Nurr1/NR4A2 participa en el desarrollo y el mantenimiento del fenotipo dopaminérgico de las neuronas nigroestriatales, y alteraciones en este gen han sido correlacionadas con diversas patologías como la enfermedad de Parkinson (EP). Algunas evidencias apuntan a que existe un mecanismo de regulación de Nurr1 basado en su localización subcelular. En esta tesis doctoral hemos identificado en Nurr1 una señal bipartita de localización nuclear (NLS) dentro del dominio DBD y dos señales de exporte nuclear (NES) en su dominio LBD. Los mutantes NLS no pueden entrar en el núcleo, disminuyendo la expresión del reportero de NBRE-Luc. La fusión de la señal NLS2 a la proteína EGFP indujo la acumulación nuclear de EGFP, indicando que esta secuencia es suficiente para la localización de Nurr1 en el núcleo. La mutagénesis de las señales NES provocó la acumulación de Nurr1 en el núcleo en presencia de CRM1. La fusión de las señales NES a la proteína EGFP indujeron el exporte en presencia de CRM1. El estrés oxidativo es un componente importante en diversas patologías, sin embargo, se desconoce que implicación puede tener sobre Nurr1. Mediante inmunofluorescencia e inmunoblot se observó que Nurr1 es principalmente nuclear bajo condiciones basales. Sin embargo, Nurr1 se acumula en el citoplasma tras 30 min de tratamiento con arsenito sódico. Estos resultados nos llevaron a la conclusión de que Nurr1 posee un mecanismo de regulación asociado al control de su localización subcelular y que el estrés oxidativo cambia este equilibrio en favor de la acumulación citosólica de Nurr1. Otro componente relacionado con la EP es la quinasa GSK-3beta. Por ello quisimos estudiar si GSK-3beta participa en la pérdida de Nurr1 en el desarrollo de la EP. En esta tesis doctoral describimos que esta quinasa regula la estabilidad de Nurr1, favoreciendo su degradación proteasomal. GSK-3beta provoca el retraso de la movilidad electroforética de Nurr1 mediante fosforilación, pero no induce cambios en la localización subcelular de Nurr1. Identificamos una región candidata que denominamos ¿core¿ 2, que no responde al retraso de la movilidad electroforética, pero que no aumentó la estabilidad de Nurr1 en presencia de GSK-3beta. Así, estos resultados nos llevaron a la conclusión de que GSK-3beta favorece la degradación de Nurr1 en la fracción nuclear, de manera independiente a la región ¿core¿ 2.