Helicasas en el replisoma estudios bioquímicos y estructurales

• Autores: Diego Lanzarot Zúñiga
• Directores de la Tesis: Luis Enrique Donate (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2002
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Fernando de la Cruz (presid.), Luis Manuel Menendez Quintanal (secret.), Juan Pablo Albar (voc.), Silvia Ayora Hirsch (voc.), Óscar Antonio Llorca Blanco (voc.)
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• Resumen

  • Obtención de una batería de anticuerpos policlonales monoespecíficos que reconocen epítopos de secuencia de la helicas replicativa DnaB y de su proteína auxiliar DnaC.

    Estos anticuerpos son de gran utilidad en un variado espectro de estudios funcionales y estructurales. Para la identificación y purificación de estos anticuerpos el doctorando introdujo en nuestro laboratorio la técnica conocida como de Pep Sport Synthesys.

    * Identificación, validación e interpretación estructural de zonas de secuencia de la helicasa DnaB implicadas en la interpretación con su proteína auxiliar.

    Para ello, empleó una combinación de técnicas y bioquímicas y de análisis de la estructura de proteínas (secundaria, terciaria y cuaternaria).

    * Caracterización estructural del polimorfismo cuaternario de la helicasa replicativa G40P e identificación de los fenómenos que gofiernan este fenómeno in vitro, para lo que empleó técnicas de microscopía electrónica de especímenes teñidos negativamente y procesamiento digital de imágenes, con especial hincapié en el capítulo de detección de heterogeneidades en la simetría rotacional de las partículas. En paralelo, realizó estudios bioquímicos que permitieron encontrar una correlación muy buena a la vez que sugerente entre el estado cuaternario de una helicasa replicativa y su actividad bioquímica.

    * Formación y visualización por vez primera de los complejos entre la helicasa G40P y su proteína auxiliar G39P. Los estudios de microscopía electrónica de estos complejos han descrito por vez primera la existencia de polimorfismo cuaternario en un complejo helicasa-proteína auxiliar.

    * Visualización de complejos entre una proteína organizadora del replisoma (DnaA) y una helicasa (DnaB) ensamblados sobre el origen de replicación bacteriana (oriC de E.Coli), lo que ha permitido definir estrategias para el estudio de estos complejos nucleoproteícos clave mediante técnicas de