La aspirina modifica en los megacariocitos las propiedades pre-apoptóticas de las plaquetas de novo

• Autores: Carlos Hugo Martínez Martínez
• Directores de la Tesis: José Javier Zamorano Leon (dir. tes.), Antonio López Farré (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 2021
• Idioma: español
• Número de páginas: 126
• Tribunal Calificador de la Tesis: M. A. García Fernández (presid.), Luis Rodolfo Collado Yurrita (secret.), Sara González Sánchez (voc.), Pilar Caridad Morata Barrado (voc.), Juan Carlos Porres Cubero (voc.)
• Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Investigación en Ciencias Médico-Quirúrgicas por la Universidad Complutense de Madrid
• Materias:
  • Ciencias médicas
    • Patología
      • Patología cardiovascular
    • Farmacodinámica
      • Mecanismos de acción de los medicamentos
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Docta Complutense
• Resumen
  • español

    El tratamiento crónico con ácido acetilsalicílico (ASA), entre 100-300 mg/día, es primera elección en la prevención de eventos vasculares trombóticos agudos. Sin embargo, las plaquetas no son completamente inhibidas por ASA hasta en un 20% de la población general y un 40% de la población diabética. Este efecto se conoce como síndrome de resistencia plaquetaria a ASA. En la actualidad, no se comprende completamente la etiología y los mecanismos involucrados de este síndrome. Recientemente, se describió que las plaquetas resistentes a ASA mostraban un contenido proteico menor que las plaquetas sensibles a ASA. La plaqueta tiene una capacidad de síntesis proteica muy limitada. Por ello, estas diferencias en el contenido proteico plaquetario entre sensibles y resistentes a ASA debería producirse desde la generación de la palqueta por el megacariocito. La activación plaquetaria depende de la funcionalidad mitrocondrial, que está estrechamente relacionada con la apoptosis celular. El objetivo principal del trabajo fue estudiar si la exposición in vitro de megacariocitos a concentraciones bajas de ASA podía modificar las características apoptóticas de las plaquetas nuevas formadas. El diseño experimental se basó en la estimulación in vitro de células Meg-01 (línea celular megacarioblástica humana), con 10 nmol/L 12-miristato-13-acetato de forbol (PMA), para que generaran plaquetas, en presencia y ausencia de ASA (0,33 mmol/L). Esta concentración de ASA se eligió porque es la observada en el suero de voluntarios sanos tratados con 200 mg/día de ASA. Se analizaron la expresión y/o actividad de diferentes marcadores de apoptosis y funcionalidad mitocondrial en plaquetas generadas en presencia y ausencia de ASA Los resultados evidenciaron la generación de partículas similares a plaquetas (PLPs) a partir de células Meg-01 incubadas con PMA. Las PLPs derivadas de megacariocitos incubados con ASA tenían un mayor contenido de proteínas proapoptóticas Bax y Bak comparadas con las PLPs derivadas de células Meg-01 incubadas sin ASA. Sin embargo, a pesar de mostrar este fenotipo proapoptótico las PLPs formadas desde megacariocitos incubados con ASA en condiciones basales no tenían un contenido diferente de citocromo C citosólico o de actividad caspasa-3 respecto a las PLPs generadas en ausencia de ASA. Tras estimulación de las PLPs con ionóforo de calcio A23187 (10 ¿mol/L), tanto el contenido de citocromo C citosólico como la actividad caspasa-3 fue mayor en las PLPs formadas de novo desde megacariocitos incubados con ASA comparado con PLPs formadas en ausencia de ASA. Además, las PLPs expuestas a ASA mostraron menor actividad citocromo C oxidasa tras incubación con ionóforo de calcio A23187 que las PLPs estimuladas con ionóforo de calcio no expuestas a ASA. La densidad de mitocondrias entre PLPs de megacariocitos expuestos o no a ASA no fue diferente entre los dos grupos de PLPs. El antagonista de L-arginina, inhibidor de la actividad óxido nítrico sintasa 3, (L-NAME, 10-4 mol/L)), redujo la traslocación de la proteína Bak a la mitocondria y la actividad caspasa-3 en PLPs estimuladas por A23187 y generadas en presencia de ASA. Como conclusiones, en condiciones de no estimulación, las PLPs generadas de megacariocitos en presencia o ausencia de ASA no tienen activada la vía intrínseca de la apoptosis, a pesar del fenotipo apoptótico que presentan las PLPs derivados de megacariocitos incubados con ASA. Sin embargo, la estimulación con ionóforo de calcio A23187 de PLPs generadas en presencia de ASA indujo la estimulación de la vía intrínseca de la apoptosis de forma significativamente más evidente que en las PLPs generadas en ausencia de ASA. El óxido nítrico está involucrado en la mayor actividad caspasa-3 y en la traslocación a la mitocondria de la proteína pro-apoptótica Bak en las PLPs de megacariocitos incubados con ASA respecto a los no incubados con ASA

  • English

    Chronic treatment with low doses of acetylsalicylic acid (the term Aspirin or its abbreviation ASA will be used interchangeably throughout the text). Between 100-300 mg/day ASA doses, is used in the prevention of acute thrombotic vascular events. However, in a significant number of patients treated daily with ASA, their platelets are not completely inhibited. This effect is known as platelet resistance syndrome to ASA. Platelet ASA resistance syndrome is estimated to occur in 20% of the general population treated with ASA and up to 40% of the diabetic patient population. Different mechanisms involved in platelet resistance syndrome to ASA have been speculated, including non-adherence to treatment, prior administration of NSAIDs, the existence of a different isoform of cyclooxygenase, cyclooxygenase-2, in platelets, lack of ability of ASA-resistant platelets and / or leukocytes of patients with ASA-resistant platelets to generate nitric oxide etc...