Avances metodológicos para el estudio microscópico del ganglio espiral de cetáceos
- Autores: Tania Aurora Ramírez Herrera
- Directores de la Tesis: Antonio Jesús Fernández Rodríguez (dir. tes.), Marisa Ana Andrada Borzollino (codir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Las Palmas de Gran Canaria ( España ) en 2020
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Miguel Ángel Sierra Plana (presid.), Miguel Antonio Rivero Santana (secret.), Aniceto Méndez Sánchez (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Sanidad Animal y Seguridad Alimentaria por la Universidad de Las Palmas de Gran Canaria
- Materias:
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- Tesis en acceso abierto en: acceda
- Resumen
El oído en los cetáceos es un órgano que ha sido de gran interés en la comunidad científica durante décadas. Se han realizado numerosos estudios sobre su anatomía, fisiología, patología al respecto. La porción nerviosa del oído de los cetáceos, en concreto el ganglio espiral, juega un papel fundamental en la transmisión del sonido, por lo que podría ofrecer información clave sobre la audición y procesos patológicos, tanto de origen natural como antropogénico.
El ganglio espiral forma parte del oído interno, que en los cetáceos odontocetos se encuentra en el interior de la porción timpánica del complejo timpánico-periótico, el cual está compuesto principalmente por tejido óseo. Esta situación anatómica, hace necesaria la instauración de un protocolo especial para su análisis.
El objetivo del presente trabajo fue estandarizar un protocolo de descalcificación del oído de los cetáceos para el estudio morfológico e inmunohistoquímico del ganglio espiral.
Se realizaron 9 protocolos a 34 muestras de oídos procedentes de las Islas Canarias de descalcificación distintos, compuestos principalmente por ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), ácido fórmico e Histofix® descalcificador 3 a distintas concentraciones y temperatura. Por lo general las muestras fueron embebidas en parafina, excepto tres oídos, a los que se les realizaron cortes en frío en un criostato.
Generalmente el descalcificar con EDTA ofreció mayor tiempo de descalcificación y con Histofix® descalcificador 3 menor. Los protocolos que mejor conservaron la morfología macroscópica y ofrecieron mayor facilidad del manejo fueron los compuestos por EDTA e Histofix® descalcificador 3 a temperatura ambiente. Las imágenes histológicas del ganglio espiral que ofrecieron mayor calidad de imagen fueron las sometidas a los protocolos de descalcificación compuestos por EDTA, tanto a temperatura ambiente como a 4ºC. Fueron las criosecciones, descalcificadas previamente con EDTA, las que resultaron en mejor conservación de la antigenicidad. Fueron identificadas tres proteínas, calretinina, HSP70 y nNOs, identificadas anteriormente en el ganglio espiral de otras especies, en las neuronas del ganglio espiral de cuatro cetáceos.
El protocolo compuesto por EDTA a temperatura ambiente, y procesado en el criostato, a pesar del largo periodo de descalcificación, ofrece las mejores condiciones para un estudio y análisis completo del ganglio espiral en cetáceos.
