Resumen de Aplicación de nuevas herramientas en distintas etapas de estudios metabolómicos

María de la Peña Vallejo Calvo

• La memoria se encuentra dividida en los siguientes apartados: a)INTRODUCCIÓN GENERAL El presente trabajo está formado por varios estudios metabolómicos y trata de desarrollar las distintas etapas que los forman: constitución del experimento biológico, selección de la técnica analítica para el análisis de las muestras, pretratamiento de los datos obtenidos, aplicación de técnicas de análisis multivariante y finalmente búsqueda de una posible interpretación biológica.

  b)CAPÍTULO I El objetivo global del primer capítulo ha consistido en explorar las capacidades de la Electroforesis Capilar como herramienta para la metabolómica, y su aplicación al estudio del efecto del tratamiento con antioxidantes (vitaminas C y E) en un modelo animal de estrés oxidativo: la rata hecha diabética por inyección de estreptozotocina c)CAPÍTULO II El principal problema detectado en el capítulo anterior, fue el tratamiento posterior de los datos obtenidos con los perfiles de orina de rata del estudio metabolómico, ya que era un procedimiento muy tedioso y limitaba enormemente la eficacia de las herramientas estadísticas empleadas a continuación.

  Por lo tanto, uno de los objetivos de esta parte del trabajo consistió en explorar otras técnicas de pretratamiento de datos que permitieran aplicar posteriormente herramientas estadísticas más complejas y extraer resultados significativos de la huella completa de orina.

  d)CAPÍTULO III En los dos capítulos anteriores de la presente memoria, las muestras utilizadas procedían de un modelo animal ,ahora bien, el objetivo final de cualquier estudio clínico siempre va a ser su aplicación a muestras humanas. Por lo tanto, uno de nuestros planteamientos en esta parte del trabajo consistía en llevar a cabo un análisis metabolómico con muestras humanas reales y comprobar si efectivamente los resultados que se obtenían podían considerarse válidos de cara a futuras investigaciones.

  Para ello se emplearon muestras de orina de niños prepúberes sometidos a tratamiento insulínico y se probaron tanto los métodos de análisis como los modelos quimiométricos desarrollados con anterioridad para básicamente tratar de comprobar si éramos capaces de diferenciar las muestras controles de las patológicas.

  Las técnicas empleadas para tal fin fueron, por un lado en nuestro laboratorio la Electroforesis Capilar, con los dos métodos desarrollados previamente, y por otro la Resonancia Magnética Nuclear . Con los resultados obtenidos por ambas técnicas podríamos realizar no solamente la comparativa de los mismos, sino que cabría la posibilidad de unirlos y aplicar sobre dicha unión nuestro modelo quimiométrico para valorar si de esta forma se lograba alguna mejora.

  e)CAPÍTULO IV El último capítulo de la presente memoria supondría un paso más allá en el estudio metabolómico.

  Las muestras utilizadas en el mismo han sido muestras de plasma de individuos sanos y de pacientes o bien con síndrome coronario agudo sin elevación de la onda ST (NSTEACS) o bien con ateroesclerosis de carótida estable. La técnica de elección para la obtención de la huella de los metabolitos de bajo peso molecular en plasma ha sido la Cromatografía de Gases acoplada a Espectrometría de Masas.

  El objetivo del presente estudio no sería solamente como en los capítulos anteriores lograr la clasificación de los grupos en función de si las muestras eran o no patológicas, sino que también se trataba de identificar aquellos metabolitos responsables de la clasificación; y yendo todavía un poco más lejos otro objetivo sería el estudio de las correlaciones existentes entre las variables que parecen ser determinantes para la clasificación con el resto de los metabolitos del perfil.