La hemoglobina glicosilada como determinación de rutina en el laboratorio asistencial. Valoración crítica de las distintas técnicas
- Autores: Inmaculada Domínguez Pascual
- Directores de la Tesis: María Teresa Herrera del Rey (dir. tes.), Manuel Conde Sanchez (dir. tes.), María Luisa González Rodríguez (tut. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Sevilla ( España ) en 2013
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Antonio María Rabasco Álvarez (presid.), Juan Miguel Guerrero Montavez (secret.), Manuel Aguilar Diosdado (voc.), Antonio Ordóñez Fernández (voc.), Concepción González Rodríguez (voc.)
- Materias:
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- Resumen
La Hemoglobina glicosilada es un término utilizado para describir una serie de componentes estables minoritarios de la hemoglobina que se forman lentamente y sin intervención enzimática, a partir de la hemoglobina y la glucosa. La velocidad de formación de la HbA1c es directamente proporcional a la concentración glucosa en sangre y como los eritrocitos son fácilmente permeables a la glucosa, el nivel de la HbA1c en una muestra de sangre facilita la historia glucémica de los 120 días anteriores, duración media de la vida de estas células. Su medición da una retrospectiva, especialmente de las últimas 4-8 semanas de los niveles de glucosa y es considerado el mejor indicador de control en los pacientes diabéticos tipo 1 y 2.
En la actualidad la determinación de HbA1c se ha convertido prácticamente en un parámetro de rutina. Hasta hace poco solamente era utilizada para monitorizar la glucemia del paciente diabético, pero durante estos últimos años se comienza a plantear el uso de la hemoglobina glicosilada como diagnóstico de la diabetes mellitus.
Todos estos acontecimientos, han llevado a un incremento en la demanda de la determinación de HbA1c, siendo esencial que ese incremento no comprometa a la calidad de su determinación. La diversidad de métodos existentes actualmente, hace necesario un estudio sobre las ventajas e inconvenientes que presentan cada uno de ellos para la determinación de hemoglobina glicosilada en un laboratorio asistencial.
Hemos centrado esta tesis en realizar una evaluación crítica de la metodología empleada en nuestro laboratorio clínico, estudiar las características y limitaciones del método, así asegurar que utilizamos un método apropiado para nuestra población local y conocer nuestra respuesta a la demanda clínica para la correcta monitorización y diagnóstico de la diabetes mellitus, proponiéndonos los siguientes objetivos: 1.-Analizar el efecto del tiempo de elución del HPLC sobre la cuantificación de la hemoglobina glicosilada. Se concluye que los métodos de HPLC con tiempo corto de análisis utilizados en nuestro laboratorio, son una alternativa útil que no comprometen ni la calidad ni la reproducibilidad de los resultados obtenidos. Presentan la ventaja de la velocidad, automatización, considerándolo adecuado para nuestro laboratorio , debido al elevado número de muestras recibidas diariamente para la determinación de HbA1c, utilizada para monitorizar el control glicérico del paciente diabético, o bien empleada con fines diagnósticos 2.- Evaluar la transferibilidad de los resultados de la hemoglobina glicosilada obtenidos por los equipos de Point of Care (POCT) y los equipos de HPLC con tiempo de elución reducido utilizados en nuestro laboratorio asistencial. Se concluye que los resultados obtenidos por los equipos POCT son intercambiables con los resultados del equipo utilizado por nuestro laboratorio asistencial, siendo totalmente fiable los resultados de los que se disponen en las consultas médicas con los equipos POCT y permitiendo si fuese necesario, cambiar la conducta del médico o del paciente para mejorar el control de la glucosa en sangre. Por tanto, se puede decir, que el POCT-HbA1c es una alternativa que proporciona información de forma rápida para ayudar a la toma de decisiones clínicas 3.- Estudiar la influencia de las variantes derivadas y estructurales de hemoglobina en las distintas técnicas utilizadas para la cuantificación de la hemoglobina glicosilada en nuestro laboratorio asistencial y en las consultas de diabetología (POCT). El laboratorio además de responsabilizarse de la calidad y reproductibilidad de los resultados de HbA1c para conseguir los objetivos analíticos, es importante conocer las posibles interferencias con la técnica al seleccionar los métodos de ensayo: 3.1 Influencia de las derivadas de la hemoglobina glicosilada: debido al elevado número de muestras que recibimos en nuestro laboratorio asistencial, procedentes de pacientes de la consulta de pre-diálisis, estudiamos con detalle la influencia de la Hbcarbamilada con el método utilizado en nuestro laboratorio. Se concluye que existen diferencias significativas entre las medias de HbA1c obtenidas en el HA 8160 frente a las obtenidas con los equipos de elución corto, decidiendo buscar una ruta alternativa para las muestras de los pacientes de HbA1c procedentes de pre-diálisis, las cuales pasan directamente a un equipo de HPLC con un tiempo de elución de 3 minutos, considerado el gold estándar para esta determinación. En los equipos POCT estudiados en ninguno de los casos encontramos diferencias significativas entre las medias de HbA1c obtenidas en el VARIANT TURBO de tiempo de elución de 3 minutos frente a las obtenidas con los equipos de POCT. Siendo los resultados válidos para la población con insuficiencia renal crónica.
3.2 Influencia de las variantes estructurales de la hemoglobina glicosilada: en nuestro estudio nos planteamos conocer cómo afecta las hemoglobinopatías presentes en nuestra población diabética y no diabética. Se concluye que la hemoglobina S, variante estructural frecuente en la población, afecta a la determinación de HbA1c sobreestimando los resultados cuando usamos el método de HPLC con tiempo de análisis reducido. La hemoglobina Fetal, variante estructural frecuente en la población, afecta a la determinación de HbA1c cuando usamos el equipo de Point of Care DCA, pero con resultados que no son clínicamente significativos. La Hemoglobina J, variante estructural muy poco frecuente en la población, independientemente de donde tiene la mutación de aminoácidos, interfiere disminuyendo los resultados de hemoglobina glicosilada obtenido por los equipos de HPLC a diferentes tiempos de análisis. La Hemoglobina Sevilla, ¿nueva variante estructural¿, detectada en nuestro estudio, interfiere disminuyendo los resultados de hemoglobina glicosilada obtenido por los equipos HPLC a diferentes tiempos de análisis.
4.-Evaluación de un protocolo de identificación de picos desconocidos en el cromatograma de hemoglobina glicosilada y su relación con variantes estructurales de hemoglobina. Se concluye que La detección de variantes de las hemoglobinas conocidas (HbS, HbC, HbD, HbE, HbF), infrecuentes (HbJ) y desconocidas (¿Hemoglobina Sevilla¿), ha sido posible a un protocolo diseñado por nuestro laboratorio para la revisión de los cromatogramas obtenidos por el equipo VARIANT TURBO. Estas variantes presentan cambios estructurales que le confieren características que permiten su detección por métodos cromatográficos y los valores de expresión de la variante producen modificaciones en la cuantificación de HbA1c. Es importante diseñar un protocolo estandarizado para los laboratorios clínicos que utilicen la cromatografía para la determinación de HbA1c .Existen variantes de la hemoglobina aún desconocidas que interfieren en la exactitud de estos métodos, por lo que es necesaria su identificación para optimizar los métodos de obtención de datos útiles para determinar los valores de la HbA1c en los individuos que las expresan, con el fin de mejorar así los métodos de diagnóstico y/o seguimiento de la diabetes mellitus en estos pacientes. En estos casos, no es apropiado el uso de estos métodos, VARIANT y VARIANT II, usados por nuestro laboratorio asistencial para la determinación de HbA1c, siendo necesario una exhaustiva inspección de los cromatogramas obtenidos para la identificación de picos anómalos y rechazar los valores obtenidos. Cuando ocurre esto, la muestra debe ser analizada por un método basado en otro principio de determinación que no esté influenciado por esta variante como es el caso de la cromatografía de afinidad o inmunoensayo
