DIDO3 organiza la red génica que regula la especificación y el destino de las células B

• Autores: Fernando Gutiérrez del Burgo
• Directores de la Tesis: Ricardo Villares García (dir. tes.), Carlos Martinez Alonso (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2020
• Idioma: español
• Número de páginas: 147
• Tribunal Calificador de la Tesis: Manuel Fresno Escudero (presid.), Antonio Bernad Miana (secret.), María Luisa Gaspar Alonso-Vega (voc.)
• Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Biociencias Moleculares por la Universidad Autónoma de Madrid
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Biblos-e Archivo
• Resumen

  • El gen Death-InDucer Obliterator (Dido1) codifica tres isoformas proteicas (DIDO1, 2 y 3), expresándose la última constitutivamente en todos los tejidos de animales vertebrados. En las células madre embrionarias (ESC) DIDO3 tiene un nivel máximo de expresión que se va reduciendo conforme avanza su desarrollo. La región específica de DIDO3 está codificada por el exón 16 de Dido1 y su ablación conduce a la muerte embrionaria temprana. Las ESC de ratones deficientes (Dido1∆E16) mantienen su capacidad de autorrenovación y los niveles de expresión de genes característicos como Oct4 y Nanog. Sin embargo, su capacidad de diferenciación se ve afectada.

    Durante el desarrollo de este trabajo hemos analizado la función de Dido1 y, en particular, de la isoforma DIDO3 en la diferenciación del sistema hematopoyético y la maduración del linaje B, para lo que hemos generado un ratón Dido1∆E16 condicional en línea hematopoyética.

    Estos ratones muestran celularidad reducida en médula ósea, con leucopenia periférica moderada y linfopenia B severa. Todas las poblaciones de precursores de células B (LSK, CLP, prepro-B, pro-B, pre-B, B inmaduras) y células B maduras se encuentran reducidas respecto a ratones normales y las células LKS mutantes fracasan en experimentos de repoblación competitiva y de diferenciación in vitro.

    Mediante el uso de TaqMan Low Density Arrays hemos analizado la expresión de marcadores de diferenciación en precursores aislados por citometría de flujo. La población más primitiva determinada hacia el linaje B (prepro-B) muestra una disminución generalizada tanto de marcadores de superficie como de factores de transcripción conocidos por regular el desarrollo de células B (E2a, Ebf1, Foxo1). En fases más avanzadas se detecta un defecto en la expresión de genes relacionados con la supervivencia y ciclo celular (Bcl2, Cdkn2a) y defectos en la represión de genes característicos de células indiferenciadas (Nanog, Sca1, C-kit) y en genes que codifican para los componentes del pre-BCR (Igll1, Cd79a/b, Ighm) cuya expresión debería decaer tras la señalización por el propio pre-BCR.

    La presencia de un dominio PH con afinidad por H3K4me3, sugiere que DIDO3 se asocia con promotores transcripcionalmente activos y puede afectar a la accesibilidad del DNA en la cromatina. La conformación y estructura de la cromatina es un proceso dinámico y esencial para que las células madre entren en procesos de diferenciación, por lo que hemos analizado esta posibilidad mediante ensayos de ATAC-Seq sobre LSK y CLP. Nuestros resultados indican diferencias significativas en la accesibilidad promotores y otras secuencias potencialmente reguladoras, destacando en genes cuya expresión es fundamental para la maduración y diferenciación de células del linaje B como Ebf1 y Gata3.

    Analizando el transcriptoma de células pre-B se ha observado que Dido1 también influye en la reestructuración de la cromatina asociada a la recombinación V(D)J del locus Igh regulada por PCR2.

    Estos datos permiten identificar a DIDO3 como un nuevo agente modulador de la expresión génica que interviene en el progreso de la diferenciación hematopoyética.