Caracterizacion de promotores alternativos en el gen humano de la proteina intercambiadora de aniones ae2. Analisis de polimorfismos en la cirrosis biliar primaria

• Autores: Juan Lecanda Cordero
• Directores de la Tesis: Juan Francisco Medina Cabrera (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Navarra ( España ) en 2000
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: María Pilar Fernández Otero (presid.), Ana Patiño García (secret.), Carlos Gabriel de Miguel Vázquez (voc.), Iñigo Lasa Uzcudun (voc.), Ignacio José Encio Martínez (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
      • Proteínas
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• Resumen

  • Estudiando el patron de expresión del gen humano de la proteina intercambiadora de aniones AE2 en células HepG2, se observó la existencia de regiones promotores alternativas solapantes, en la mitad de 5¿ del intron 2. Se identificaron dos exones iniciales alternativos (exones 1b1 y 1b2),cada uno de los cuales seune al exón 3 en los correspondientes transcritos AE2b1 y AE2b. El exón 1b1 es homólogo a la variante "b" descrita en rata. Codifica 3 aminoácidos iniciales (MTQ) en la isoforma AE2b1, que reemplazan a los 17 aminoacidos iniciales (MTQ) enla isoforma AE2b1 que reemplazan a los 17 aminoácidos (MSSAPRRPAKGADSFCT) de la forma completa de la proteina (AE2a). El exón 1b2 codifica 8 aminoácidos iniciales (MDFLLRPQ) en la isoforma AE2b2. Esta ultima isoforma no ha sido identificada en ninguna otra especie hasta el momento. La proporcion de estos transcritos AE2a, AE2b1 y AE2b, en celulas HepG2 fue determinada como 10:1:1, respectivamente.

    El exón 1b1 tiene sitios de inicio multiples, mientras que el exón 1b2 presenta un sitio de inicio predominante. El analisis de las secuencias de las regiones promotoras alternativas mostró la presencia de numerosos motivos de unión de factores de transcripción abundantes en el hígado (HNF).

    Ensayos duales de luciferasa demostraron la capacidad de estas regiones de activar la transcripción en celulas HepG2. El estudio semicuantitativo de la expresión de las tres isoformas en varios tejidos humanos (higado, estomago, recto,prostata,riñon y tiroides) indico que los transcritos altrnativos se expresan en higado y riñon, mientras que el transcrito AE2a se encontro en todos los tejidos estudiados.

    En la región promotora alternativa de AE2b, se ha identificado un polimorfismo C/T en la posición -290b1, muy cerca en direccion 5¿de una caja GC con un motivo de unión a ETF. Este polimorfismo podria contribuir a la expresión disminuida de AE2 en la cirrosis biliar primaria, bien por si