La respuesta monocitaria a un estimulo con lipopolisacárido (LPS) es la producción de diferentes tipos de mediadores solubles. Entre ellos, los más caracteristicos son citoquinas proinflamatorias como IL-1B y TNFa.
En los procesos de sepsis y shock septico los mediadores que deben estar restringidos al sitio de infección, se encuentran a nivel sistémico, con los alteraciones funcionales que esto implica. En estos pacientes se ha encontrado un estado de tolerancia a LPS, caracterizado por la incapacidad de los monocitos de elaborar una respuesta adecuada ante un estímulo con LPS.
En este trabajo se estudia mediante citometría de flujo un modelo de inducción de tolerancia in vitro en el que se observa una disminucion en la producción de TNFa que no se acompaña de descenso de IL-1B. Mediante el marcaje simultáneo de CD14 y citoquinas intracelulares comprobamos que los monocitos en los que se ha inducido tolerancia no presentan una menor expresion de CD14. Asimismo, mediante la adicción de agentes bloqueantes del aparato de Golgi para evitar la liberación de los mediadores inmunosupresores posiblemente implicados, y junto con los datos presentados de tolerancia selectiva, descartamos la implicación, unicamente, de mediadores solubles.
El uso de agentes bloqueantes del aparato de Golgi nos permitió regular negativamente la expresión de CD14 de membrana de los monocitos, posibilitando el estudio de la via del CD14 soluble. Comprobamos la funcionalidad de dicha via en monocitos que unen complejos sCD14-LPS mediante la produccion de citoquinas proinflamatorias y la imposibilidad de desarrollar tolerancia a traves de este receptor soluble en el modelo estudiado.
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