Análisis de las interacciones moleculares y del tráfico entre el citosol y el núcleo del factor de transcripción NF-kB(p50/p65) y de su inhibidor IkBa mecanismo de acción de corticodes y prostratina sobre la activación de NF-kB y la replicación del VIH

• Autores: Joaquín Miguel Rullas Trincado
• Directores de la Tesis: José Alcamí Pertejo (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2004
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Mariano Esteban Rodríguez (presid.), Pedro Bonay Miarons (secret.), María de los Angeles Muñoz Martín (voc.), Sara Ballester Jareño (voc.), Manuel López Cabrera (voc.)
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• Resumen

  • En la primera parte de este trabajo hemos analizado los mecanismos moleculares involucrados en la latencia y reactivación del vih en linfocitos humanos.

    Se ha analizado el tráfico de nf-kb y de su inhibidor ikba entre el núcleo y el citosol. Nf-kb es el principal sistema regulador de la reactivación del vih. Hemos encontrado que tanto nf-kb como su inhibidor recirculan entre el núcleo y el citosol en linfocitos humanos en reposo. Al cultivarlos en presencia del leptomicina b (lmb), un inhibidor de la exportación de proteínas nucleares, p65 e ikba se acumulan en el núcleo. En estas circunstancias hemos demostrado mediante una inmunoprecipitación que p65/p50 interaccionan físicamente. Al activar a estas células con pma, también se acumula ikba en el núcleo, aunque no se encuentra unido a nf-kb. Al añadir lmb, se acumula más ikba en el núcleo, aunque no se inhibió la unión de nf-kb al adn en un ensayo de retardo en gel. Realizando una transfección transitoria de un vector que lleva el gen de la luciferasa bajo el control del ltr se ha observado que lmb inhibe la transactivación del ltr-vih en células activadas con pma. También hemos demostrado un aumento en la cantidad de ikba en linfocitos humanos cultivados en presencia de dexametasona que correlacionó con un aumento de ikba tanto en citosol como en el núcleo y una inhibición de nf-kb al adn. Además, el tratamiento con dexametasona también resultó en una disminución de la propagación del vih en el cultivo.%&/en la segunda parte hemos analizado el efecto de prostratina en la replicación del vih.

    Prostratina es un éster de forbol que no induce la aparición de tumores y que inhibe la replicación del vih "in vitro", pero que paradójicamente reactiva al vih en células infectadas de forma latente. Para conocer mejor el mecanismo de acción de prostratina, hemos analizado el efecto de prostratina sobre la reactivación del vih y la expresión de sus correcept