Estudio de la secreción de proteínas por el sistema autotransportador de bacterias Gram-negativas

• Autores: Esteban Veiga Chacón
• Directores de la Tesis: Víctor de Lorenzo Prieto (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2003
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Fernando de la Cruz (presid.), José López Carrascosa (secret.), Anthony P. Pugsley (voc.), Miquel Coll Capella (voc.), Josep Casadesús Pursals (voc.)
• Calificación: Sobresaliente Cum Laude
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• Resumen

  • En esta tesis se presentan una serie de datos que se resumen en las siguientes conclusiones:

    1,- El sistema de secreción de las proteínas autotransportadoras (Ats), cuyo arquetipo es la proteasa IgA de Neisseria, permite la presentación ectópica de polipéptidos de muy diversas características sobre la superficie celular de E.coli a base de generar fusiones entre el dominio C-terminal del autotransportador (C-IgAP) con la secuencia polipeptídica de interés.

    2,- La capacidad de presentación superficial de polipéptidos heterólogos por los sistemas autotransportadores incluyen no sólo secuencias relativamente cortas sin puentes disulfuro, sino también proteínas globulares con enlaces S-S.

    3,- La presentación superficial de secuencias de dimerización Jun y Fos procedentes de activadores transcripcionales eucarióticos mediante fusiones a C-IgAP confirió a las correspondentes células nuevas propiedades de ahesión mutua de forma dependiente de la expresión controlada de las fusiones Jun-C-IgAP o Fos-C-IgAP.

    4,- Las fusiones entre el dominio C-IgA de los ATs y módulos scFvs alcanzaron un grado de presentación superficial del anticuerpo correctamente estructurado en torno al 20% de la proteína híbrida total expresada. Tal estructuración, en particular la formación de puentes disulfuro, dependió enteramente de la acción de chaperonas periplásmicas. Esta dependencia se mantuvo en el caso de la presentación de anticuerpos de camello, si bien en este caso la presentación y actividad fue del 100%.

    5,- Los autotransportadores tienen la capacidad de exponer distintas actividades biológicas sobre la superficie de bacterias Gram-negativas. Hemos demostrado el uso de estos AT para exponer hacia el medio extracelular distintas proteínas que redirigen de forma específica la adhesión bacteriana. También, experimentos in vivo indican que podemos usar bacterias que expresan un scFv, con actividad neutralizante del v