Resumen de Caseina quinases 1 i 2 de fetge de rata: purificacio, caracteritzacio i nivells de regulacio per metabolits

Maria Plana i Coll

• Las caseina quinasas ck-1 y ck-2 citosolicas de higado de rata son independientes de nucleotidos ciclicos de ca2+ y de fosfolipidos, y fosforilan substratos con caracteristicas acidas como la caseina o la fosvitina. La ck-2 puede utilizar tanto atp como gtp como substrato donador de fosfatos, mientras que la ck-1 utiliza exclusivamente atp. Ambas enzimas se diferencian tambien por su peso molecular. La ck-2 es una enzima tetramerica de peso molecular 140.000 compuesta por dos subunidades a de mr 41.500 que parecen contener el centro catalitico y dos subunidades b de mr 27.000. Algunas preparaciones contienen una banda de mr 40.000 que parece derivar por proteolisis de la banda a. La ck-1 presenta un peso molecular de 35.000 y no deriva por proteolisis de la ck-2. Hemos estudiado la regulacion de las caseina quinasas por metabolitos in vitro . El proceso de purificacion de estas enzimas consiste en columnas sucesivas de fosfocelulosa, caseina-sepharose y gel filtracion. La purificacion de la ck-2 se continuo con una columna de deae-sepharose y una columna de afinidad de heparina-agarosa, obteniendose una actividad especifica de 200 u/mg. Las caseina quinasas utilizan como substrato donador de fosfatos el complejo atp-mg. Tanto el mn2+ como el co2+ pueden substituir al mg2+ en la formacion del complejo substrato, pero presentan un efecto antagonico con el mg2+ en la forma de cationes libres, inhibiendo las caseina quinasas mientras que el mg2+ las activa. Entre los moduladores ensayados unos afectan de manera coordinada la actividad de ambas enzimas, la espermina las activa o la cafeina las inhibe. Otros como la heparina o la quercitina son especificos y otros las afectan de manera diferencial. Asi la protamina inhibe la ck-1 y revierte la inhibicion por heparina de la ck-2. Los efectos de los moduladores pueden ejercerse directamente sobre la enzima o por interaccion con el substrato. El glucogeno inhibe la ck-1 sobre glucogeno