El sistema beta-glucosidasa de streptomyces sp. Qm-b814: proteinas y genes

• Autores: Josep Anton Pérez Pons
• Directores de la Tesis: Enrique Querol Murillo (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat Autònoma de Barcelona ( España ) en 1991
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Jaume Palau Albet (presid.), Antonio Planas Sauter (secret.), Albert Boronat (voc.), Carles Casals (voc.), Francesc Xavier Avilés Puigvert (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Enzimología
  • Ciencias de la vida
    • Genética
      • Ingeniería genética
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• Resumen

  • Las b-glucosidasas catalizan la hidrolisis de celobiosa y celooligosacaridos y producen glucosa. Estos enzimas intervienen en la degradacion enzimatica de la celulosa y son uno de sus factores limitantes. Streptomycessp. Qm-b814 (atcc 11238) presenta un sistema b-glucosidasa b-glu intracelular e inducible con celobiosa y carboximetilcelulosa. La induccion maxima se alcanza al cabo de 6-8 horas de la adicion del inductor (celobiosa). La induccion implica sintesis proteica de novo. El sistema b-glu de streptomycessp. Qm-b814 esta aparentemente formado por dos componentes mayoritarios con igual patron de induccion y similar especificidad de sustrato: la b-glu-1 y la b-glu-2 de 62 y 35 kda. Respectivamente. Utilizando como cepas receptoras mutantes "b-glu negativos" de streptomyces lividans 1326 cepa salvaje (s lividans ag-11 y ag-12) se ha aislado en el plasmido recombinante pjc910 un fragmento de aproximadamente 4.2 kb, procedente del dna de streptomyces sp. Qm-b814 cepa donante , que expresa actividad b-glu intracelular y de forma constitutiva en los mutantes y en la cepa salvaje. Por movilidad electroforetica y masa molecular (54 kda), la b-glu clonada no corresponde a las b-glu-1 y -2 observadas en la cepa donante. Se la denomino b-glu-3. Las b-glu-1 y -3 se han purificado a partir de extractos crudos de streptomyces sp. Qm-b814 y s. Lividans ag-11 pjc910 , respectivamente. Ambos enzimas presentan caracteristicas fisico-quimicas y funcionales distintas si bien el analisis de sus propiedades cataliticas permite concluir que se trata de b-glucosidasas ec 3.2.1.21. Utilizando como cepa receptora el mutante s. Lividans ag-12 se ha aislado en el plasmido recombinante pjc2510 un fragmento de aproximadamente 14 kb, procedente del dna de streptomyces sp. Qm-b814, que complementa la mutacion restaurando la expresion de la b-glu caracteristica de la cepa salvaje s. Lividans 1326. Los resultados son compatibles con una complementac