Resumen de Analisis por ingenieria de proteinas del inhibidor de carboxipeptidasa
Se ha construido un gen sintetico para el inhibidor de carboxipeptidasa de patata, una proteina de 39 residuos. El gen se ha expresado fusionado en marco de lectura a la secuencia del peptido señal ompa usando el vector de secrecion pin-iii-ompa-3. Como organismo para dicha expresion se ha usado e. Coli. Se ha obtenido asi un inhibidor recombinante (repci), que se ha purificado mediante un protocolo original, y se ha caracterizado, resultando tener el mismo peso molecular, constante de inhibicion y plegamiento que el inhibidor natural. Esto demuestra que la fusion a un peptido señal de secrecion es una forma efectiva de producir en forma recombinante proteinas pequeñas ricas en puentes disulfuro. A continuacion se obtuvieron mediante mutagenesis dirigida distintas formas mutantes del repci, que han permitido establecer la importancia de diversos residuos y grupos concretos del inhibidor en su funcion, es decir, en su capacidad inhibitoria de la carboxipeptidasa.
