Resumen de Obtenció d'una soca vacunal contra la pleuropneumònia porcina
Actinobacillus pleuropneumoniae és l'agent causant de la pleuropneumònia porcina, una malaltia altament contagiosa i sovint fatal que comporta greus pèrdues econòmiques en el sector de la porcicultura industrialitzada. En aquest treball, s'ha desenvolupat una soca d'A. pleuropneumoniae de serotip 1 susceptible de ser usada com a vacuna mitjançant la inactivació de la seva capacitat hemolítica a traves de l'eliminació en cada una de les seves hemolisines (ApxI i ApxII) d'una hèlix (H2) implicada en la formació del porus. La soca obtinguda HP816ApxI/IIH2-, resulta ser no virulenta i immunògena, i confereix gran protecció contra una infecció a dosi letal amb la soca homòloga. El mètode d'obtenció del doble mutant mitjançant recombinació homòloga en dos passos (preselecció dels recombinants senzills portadors del plasmidi cointegrat, i obtenció dels segons recombinants que resolen el plasmidi) ha permès obtenir una soca vacunal lliure de marcadors de selecció i apte per a ser usada com a vacuna.
Per a l'obtenció de la soca vacunal s'ha identificat en ambdues hemolisines una regió formada per tres hèlix que està implicada directament en la formació del porus. S'han eliminat els 15 aminoàcids corresponents a la segona hèlix (H2) en cada hemolisina, inactivant així la capacitat hemolítica de la soca. S'ha caracteritzat l'expressió de les hemolisines mutades i s'han realitzat proves de camp per a la determinació del grau d'atenuació i la capacitat protectora de la soca obtinguda.
Així mateix, s'ha posat a punt un mètode per a l'expressió i purificació preparativa de les toxines Apx, reformulant la composició del medi liquid de cultiu LB per incrementar-ne l'expressió i posant a punt un mètode de purificació per filtració tangencial que s'aprofita de la capacitat que tenen les hemolisines de formar agregats multimèrics.
