Determinación de l'estructura tridimensional de variants de prolina de la ribonucleasa pancreática humana

• Autores: Albert Canals Parera
• Directores de la Tesis: Maria Vilanova Brugués (dir. tes.), Marc Ribó Panosa (codir. tes.)
• Lectura: En la Universitat de Girona ( España ) en 2000
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Claudi Cuchillo Foix (presid.), Antoni Benito Mundet (secret.), M. Victòria Noguès i Bara (voc.), Alícia Guasch i Mitjans (voc.), Ignacio Fita Rodríguez (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
  • Ciencias médicas
    • Ciencias clínicas
      • Genética clínica
  • Ciencias tecnológicas
    • Tecnología bioquímica
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• Resumen

  • La ribonucleasa prancreática humna (HP-Rnasa, ó RNasa1; EC 3.1.27.5) es una proteína de 128 aminoácidos que pertenece a la familia de las ribonucleasas pancreáticas, y que cataliza la degradación del RNA de manera esepcífica en el extremo 3' de las bases de priimidina. Aunque tanto su producción heteróloga como su purificción habián sido descritas por diferentes grupos siguiendo diferentes procedimientos, se disponía de pocos datos estructurales sobre este enzima, i en espeical sobre su estructura tridimensional. Este desconocimiento suponía un impedimento para el diseño de variantes de la RNasa1 que muestren las actividades citotóxicas que se han descrito para otras ribonucleasas de origen no humano. La posibilidad de utilizar una proteína de origen humano para el tratamiento de ciertos tipos de cáncer hace que la robonucleasa pancreática humana sea objeto de estudio en muchos laboratorios. Con el objetivo final de hacer un estudio estructural completo de la Rnasa, se ha llevado a cabo, mediante técnicas de DNA recombinante, el diseño y contrucción de diferentes variantes de esta proteína.Dichas variantes permiten evitar algunos de los problemas que se observan tanto durante la producción como durante la purficación de la RNasa1 recombinante.

    Paralelamente se han llevado a cabo una serie de modificaciones de los residuos de prolina de la RNAsas1 que no están presentes en su homóloga voina, la ribonucleasa A. Una vez establecidos los métodos óptimos de producción y purificación de las diferentes variantes construidas mediante técnicas de DANa recombiannte, se ha llevado a cabo su carcterización, tanto desde el punto de vista estructural como bioquímico. Se han realizado estudios de desnaturalziación térmica, dicroísmo cirucular, espectrometría de masas, y de determinación de parámetros cinéticos con diferentes substratos. Gracias a los elevados niveles de producción, y a al homogeneidad de la muestra