Expressió de l'estreptolisina o en un sistema d'expressió procariota: purificació i aplicació de la proteïna recombinant
- Autores: Sandra Camprubí Giménez
- Directores de la Tesis: Francesca Canalias Reverter (dir. tes.), Marc Bruguera Vilalta (codir. tes.)
- Lectura: En la Universitat Autònoma de Barcelona ( España ) en 2006
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Francesc González Sastre (presid.), Pau Vila Cases (secret.), Xavier Fuentes Arderiu (voc.), Maria Solà Vilarrubias (voc.), Rosa Aligué Alemany (voc.)
- Materias:
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- Resumen
El Streptococcus pyogenes es una bacteria grampositiva responsable de infecciones estreptocócicas en el hombre, como la faringitis o el impetígeno, pero también es el causante del desarrollo de las secuelas postinfecciosas com la fiebre reumática o la glomerulonefritis aguda. La fiebre reumática es la principal causa de muerte por cardiopatía en personas menores de 45 años en paises subdesarrollados.
Como el organismo humano responde immunológicamente a las infecciones estreptocócicas con una plétora de anticuerpos contra los componentes celulares y extracelulares del S. pyogenes, el diagnóstico serológico de estas infecciones se basa en la respuesta immune contra productos extracelulares como la estreptolisina O (SLO), la desoxiribonucleasa B, la hialuronidasa, la NAD-glicohidrolasa o la estreptoquinasa.
La detección de los anticuerpos antiestreptolisina O (ASO) está ámpliament acceptada com a prova para el diagnóstico de las infecciones estreptocócicas, ya que aproximadamente el 80 % de los pacientes infectados presentan títulos elevados de estos anticuerpos en sangre. Actualmente, existen varios immunoanálisis para la detección de estos anticuerpos, aunque el más utilizado es el immunoanálisi turbimétrico basado en la aglutinación con látex sensibilitzado con SLO purificada apartir de cultivos de S. pyogenes. No obstante, los cultius de esta bacteria presentacos debido a su patogenicidad. Además, los cultivos son de difícil estandarización y, por los requerimientos nutricionales del S. pyogenes, los medios de cultivo se encarecen. Por estas razones, la producción de un SLO recombinante se planteó como una alternativa para resolver estas dificultades.
En el presente trabajo, se elegió un sistema de expressión procariota, Escherichia coli, porque era biológicamente seguro, sus cultivos eran reproducibles i de coste relativamente bajo.
En primer lugar, se obtuvo la secuencia codificante para la SLO apartir del DNA genómico de
