Caracterización de la estadificación molecular en carcinoma de colon. Correlación clínico-histológica
- Autores: Iban Aldecoa Ansorregui
- Directores de la Tesis: Miriam Cuatrecasas Freixas (dir. tes.), Antoni Castells (codir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2016
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Santiago Ramón y Cajal Agüeras (presid.), Adriana García Herrera (secret.), Montserrat Andreu García (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Medicina e Investigación Traslacional por la Universidad de Barcelona
- Materias:
- Enlaces
- Tesis en acceso abierto en: TESEO
- Resumen
Antecedentes: El tratamiento del carcinoma colorectal (CCR) en estadios I-II es quirúrgico, aunque un 25% de pacientes morirán de la enfermedad. El estadio ganglionar es un factor pronóstico independiente y determina el tratamiento quimioterápico. Se estadian los ganglios linfáticos (GLs) con tinción de hematoxilina-eosina (HE), poco sensible para detectar pacientes con riesgo de recidiva. Las técnicas moleculares detectan células tumorales en GL de 25-50% de los CCR negativos por HE, las cuales se asocian en el CCR precoz a mayor riesgo de recidiva y peor supervivencia. Sin embargo, el diagnóstico molecular es complejo y costoso, impidiendo su uso en la práctica clínica.
Paralelamente, los programas de cribado del cáncer colorrectal (CCR) han derivado en una mayor detección de carcinomas asintomáticos en etapas iniciales, potencialmente curables con manejo quirúrgico. Los ganglios linfáticos (GLs) de los CCRs en estadios iniciales suelen ser pequeños y pueden ser difíciles de identificar macroscópicamente. Aún así, al menos 12 GLs deben ser evaluados por espécimen para poder garantizar un estadio pN0 fiable. Los CCR precoces se tatúan endoscópicamente para facilitar la detección quirúrgica; este tatuaje endoscópico parece mejorar las tasas de GLs aislados.
Hipótesis de la tesis doctoral: La cuantificación molecular de ARNm de CK19 tumoral (carga tumoral total; CTT) en GL de CCR en estadios I y II podría correlacionarse con factores de riesgo clínicos y patológicos. Asimismo, podría correlacionarse la postividad ganglionar de ARNm de CK19 con la distribución de la tinta china en pacientes tatuados previamente por endoscopia.
Objetivos: Correlacionar la CTT de los GL de los pacientes con carcinoma de colon en estadios I-II con factores de riesgo clínicos y patológicos clásicos. Determinar si la CTT puede utilizarse como un nuevo factor de riesgo molecular en el CCR. Determinar si el tatuaje previo a la cirugía facilita la detección de la presencia de tumor en los GL de pacientes con carcinoma de colon precoz.
Metodología: Detección del ARNm de CK19 tumoral en GLs de piezas quirúrgicas de carcinoma de colon, usando la técnica One Step Nucleic Acid Amplification (OSNA). El análisis estadístico se realiza con el programa R.
Estudios realizados y resultados obtenidos: Artículo nº1: Aldecoa I et al. Molecularly determined total tumour load in lymph nodes of stage I–II colon cancer patients correlates with high-risk factors. A multicenter prospective study. Virchows Archiv 2016 Oct;469(4):385-94 El objetivo del presente estudio multicéntrico prospectivo es determinar la relación entre la carga tumoral molecular en GLs y los factores de riesgo convencionales en pacientes con cáncer de colon en estadios I-II.
Se obtuvieron 1940 GLs de 149 pacientes con cáncer de colon con estadio histológico pN0. Se cuantificó la cantidad de ARNm mensajero (ARNm) de citoqueratina 19 (CK19) en los GLs mediante la técnica Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification denominada One-Step Nucleic Acid Amplification. Se definió la carga tumoral total (CTT) de cada paciente como la suma de todas las copias de ARNm de CK19/μL de cada GL positivo por colectomía.
Se obtuvo una mediana de 15 GLs por caso (RIC 12;20). La positividad molecular se correlacionó con la presencia de áreas de alto grado (p <0,01), histología mucinosa/anillo de sello (p = 0,017), el sexo masculino (p = 0,02), el número GLs aislados (p = 0,012) y el peso total de GLs por caso (p < 0,01). La CTT se relacionó con estadio pT (p = 0,01) y tamaño tumoral (p <0,01) en los tumores de bajo grado. El estudio de regresión logística multivariante mostró una correlación independiente de positividad molecular con el género, grado tumoral y número de GLs en fresco [(IC del 95% = 0,62 a 0,79) AUC = 0,71].
Nuestros resultados muestran que la detección de ARNm de CK19 en ganglios linfáticos se correlaciona con factores de alto riesgo clásicos en pacientes con cáncer de colon en estadio I-II. La CTT es una medida cuantitativa y objetiva que puede contribuir a una mejor estadificación de pacientes con cáncer de colon precoz.
Artículo nº2: Aldecoa I et al. Endoscopic tattooing of early colon carcinoma enhances detection of lymph nodes most prone to harbor tumor burden. Surgical endoscopy 2016 Jun 20. [Epub ahead of print] El objetivo del presente estudio es evaluar el impacto del tatuaje endoscópico prequirúrgico en la detección molecular de carga tumoral en GLs de neoplasias de colon en estadios iniciales.
Métodos: Se trata de un estudio de cohorte prospectivo basado en una población de cribado de CCR en un hospital universitario terciario. Se evaluaron los GLs de colectomías con y sin tatuaje endoscópico preoperatorio mediante dos métodos, HE y RT-LAMP, detectando este último ARNm tumoral de citoqueratina 19 (CK19). Se comparó la cantidad de la carga tumoral y los valores de GLs obtenidos entre especímenes tatuados y no tatuados.
Resultados: Se evaluaron mediante HE y RT-LAMP 936 GLs obtenidos de 71 colectomías que contenían carcinomas precoces y adenomas endoscópicamente irresecables (8 pT0, 17 PTI, 27 pT1, 19 pT2); 47 de 71 (66,2%) estaban tatuados. La positividad molecular en GLs se correlacionó con la presencia de tatuaje ganglionar [p <0,001; odds ratio 3.1 (95% IC 1.7 a 5.5)]. Se obtuvo un número significativamente mayor de GLs en especímenes tatuados en comparación con los no tatuados (mediana 17 GLs vs. 14,5 GLs; p = 0,019).
Conclusiones: el tatuaje endoscópico permite la detección de los ganglios linfáticos más proclives a albergar células tumorales y aumenta el número de ganglios linfáticos aislados.
Conclusiones: 1. La evaluación mediante la técnica OSNA permite la detección molecular de células tumorales en los ganglios linfáticos en un 51% de pacientes con carcinoma de colon en estadios I-II.
2. Esas positividades OSNA se correlacionan con algunos factores de riesgo clásicos del carcinoma colorrectal, como el número de ganglios linfáticos aislados, el sexo masculino y el alto grado histológico.
3. Se ha observado a nivel molecular una probable diferencia de progresión ganglionar en los carcinomas de alto y bajo grado. Estos últimos presentan aumentos progresivos significativos de carga tumoral total dependiendo de su tamaño y estadio pT.
4. La realización de tatuaje endoscópico preoperatorio permite una mayor recolección de ganglios linfáticos en las muestras histológicas evaluadas.
5. Los ganglios linfáticos tatuados presentan mayor probabilidad de presentar positividad molecular.
6. Gracias al mayor número de ganglios linfáticos recogidos y de distribución del lecho tumoral en los ganglios linfáticos tatuados, es recomendable tatuar todos los tumores precoces y adenomas sospechosos de transformación maligna, independientemente de su localización.
7. La técnica OSNA permite obtener un amplio abanico de datos, desde valores nominales (cuántos ganglios positivos) hasta variables continuas como la carga tumoral total.
8. La detección molecular de células tumorales en los ganglios linfáticos de cáncer de colon es un marcador de la carga tumoral de dichos ganglios linfáticos. La significancia pronóstica de la misma debe ser dilucidada.
9. La búsqueda de ganglios linfáticos en fresco es una técnica factible en el contexto de la práctica asistencial de los departamentos de Anatomía Patológica.
