Resumen de Identification of human sperm proteome abnormalitis in infertile patients

Claudio Attardo Parrinello

• La presente tesis doctoral ha sido diseñada y desarrollada según los tres siguientes objetivos: Objetivo número 1: Uno de los requisitos fundamentales para la fertilización es la correcta motilidad del espermatozoide, cuyas alteraciones han sido observadas como una causa frecuente de Infertilidad masculina. Sin embargo, a día de hoy, falta una completa comprensión de los mecanismos moleculares que regulan la motilidad del espermatozoide. Hemos comparado diferentes poblaciones de espermatozoides que difieren en motilidad, seleccionadas por la técnica del swim-up (Motiles vs Non motiles), con el fin de determinar si existen diferencias en la expresión de proteínas.

  Específicamente, a través de técnicas de proteómlca diferencial acoplada con LC¬ MS/MS, hemos Identificado 887 proteínas, 93 de las cuales eran expresadas de manera diferencial en las dos populaciones de espermatozoides con diferente motilidad. La mayoría de las proteínas que se encontraron alteradas están implicadas en la motilidad del espermatozoide. Particularmente, la formación de clto esqueleto, el metabolismo energético y las chaperonas son las famlllas de proteínas desreguladas en la población de espermatozoides menos motiles. Además, nuestros resultados sugieren que otras vías energ􀁸ticas (clck> de los ácidos trlcarboxfllcos, OXPHOS y la oxidación de los ácidos grasos), a parte de la glícólisis, contribuyen a regular la motilidad del espermatozoide humano.

  Objetivo número 2: La proteómica ha contribuido a la caracterización del proteoma del espermatozoide. Además, el estudio comparativo del proteoma de pacientes fértiles e infértiles han identificado diferencias en la abundancia de algunas proteínas que contribuyen en la infertilidad masculina. El segundo objetivo fue la identificación de cambios en el proteoma de espermatozoides relacionado con la calidad de los embriones resultantes después de la fertilización mediante técnicas de reproducción asistida. Los embriones a día 2 después de ICSI fueron clasificados según el criterio ASEBIR de calidad embrionaria. Se formaron dos grupos de muestras; el grupo 1 que incluía las muestras de espermatozoides que daban lugar a un alto porcentaje de embriones de buena calidad, y el grupo 2, que incluía muestras que daban un alto porcentaje de embriones de mala calidad.

  A través del uso de técnicas de espectrometría de masa y de proteómica diferencial hemos identificado 1424 proteínas, 34 de las cuales eran diferenclalmente expresadas entre los dos grupos. La mayoría de las proteínas afectadas estaban relacionadas con señalización celular, metabolismo, espermatogénesis, Interacción espermatozolde¬ovoctto y desarrollo embrionario. Las proteínas Identificadas en este estudio son potenciales candidatos como biomarcadores pronósticos y diagnósticos útiles en la clínica de reproducción asistida.

  Objetivo número 3: El daño criogénico es una consecuencia de la criopreservación, la cual puede tener un impacto negativo en la calidad del espermatozoide, afectando a su motilidad, morfología y viabilidad.

  En el tercer objetivo de esta tesis nos propusimos identificar cambios en el proteoma del es ermatozolde como consecuencia de la crio reservación.