Quitinasas chit33 y chit42 de trichoderma harzianum. Aplicaciones en el control biologico y la biotecnologia
- Autores: María Carmen Limón Mirón
- Directores de la Tesis: Tahía Benítez Fernández (dir. tes.), José Antonio Pintor-Toro (codir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Sevilla ( España ) en 1999
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: María Isabel González Roncero (presid.), Agustín Vioque Peña (secret.), Ángel Durán Bravo (voc.), Merja Penttilä (voc.), Daniel Ramón Vidal (voc.)
- Materias:
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- Resumen
Esta tesis se ha centrado en el estudio de quitinasas del hongo micoparásito Trichoderma harzianum CECT 2413,concretamente las quitinasas Chit33 y Chit42.
Se clono y secuencio el gen que codifica a la quitinasa Chit33. La regulacion del gen chit33 se etudio tanto mediante analisis de la secuencia del promotor como mediante analisis de northern y se comparó con la del gen chit42.
Estos genes se reprimen en presencia de altas concentraciones de glucosa, glicerol o N-acetil-glucosamina. Y se desreprimen principalmente en hambre de carbono o nitrogeno. Con el fin de estudiar la posible función morfogenética de estas quitinasas se estudió si las quitinasas Chit33 y Chit42 eran capacez de complementar la mutación en la quitinasa de Saccharomyces cerevisae.
Por otro lado se analizó la superexpresión de Chit33 y Chit42 eran capaces de complementar la mutación en la quitinasa de Saccharomyces cerevisae.
Por otro lado se analizó la superexpresión de Chit33 y Chit42 en T.harzianum con el fin de determinar si estas quitinasas tienen función antifúngica, así como obtener cepas para el control biológico de fitopatógenos. Las cepas resultantes mostraron mayor capacidad antagónica frente a Rhizoctonia solani Por último, se han obtenido quitinasas híbridas mediante la fusión a Chit42 de un dominio de unión a quitina (ChBD) de una quitinasa de tabaco y un dominio de unión a celulosa (CBD) de una celulasa de Trichodema reesei.
Las proteínas resultantes mostraron mayor afinidad por quitina incluso en condiciones de pH extermo o con altas concentraciones de sales que Chit42.
Además, también son capaces de degradar sustratos insolubles en mayor medida.
Por tanto, estas enzimas podrían emplearse para la degradación de quitina insoluble producida por industrias alimentarias.
