Caracterización de células tumorales circulantes en pacientes con carcinoma hepatocelular. Función de epcam en la metástasis
- Autores: Ana Carolina Rhodes Cabrerizo
- Directores de la Tesis: Jordi Bruix Tudó (dir. tes.), Loreto Boix Ferrero (codir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2017
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Francesc Cardellach (presid.), Albert Morales Muñoz (secret.), Juan Ángel Recio Conde (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Biomedicina por la Universidad de Barcelona
- Materias:
- Enlaces
- Tesis en acceso abierto en: TESEO
- Resumen
Antecedentes El carcinoma hepatocelular (CHC) es el cáncer de hígado más frecuente y la sexta neoplasia con mayor incidencia en el mundo. Constituye la tercera causa de muerte por cáncer y la decimosexta causa de muerte a nivel mundial {Forner, 2016). Afecta principalmente a Individuos con enfermedad hepática crónica que han desarrollado cirrosis (Naghvl, 2014, Forner, 2016).
En la metástasis, las células que se liberan del tumor pasan al torrente sanguíneo como células tumorales circulantes (CTCs) (Bednarz-Knoll, 2012; Entenberg, 2013). La determinación de las CTCs se basa en la detección de marcadores espedficos que sean indicativos de su presencia. La detección de CTCs es de utilidad para valorar el pronóstico tumoral o predecir la respuesta terapéutica (Hofman, 2016).
Epithellal Cell Adhesion Molecule (EpCAM) es una glicoproteína transmembrana de adhesión intercelular. En un hígado adulto sano, la expresión de EpCAM queda restringida a los colangiocitos y a las células progenitoras hepáticas y se re-expresa en los hepatocltos durante la hepatocarcinogénesls (Imrich, 2012). El papel de EpCAM en la célula transformada se asocia a mayor proliferación y a la adquisición de capacidad de migración (Munz, 2004 ), contribuyendo a empeorar el pronóstico de la enfermedad. Estudios previos muestran que EpCAM regula la expresión génica de c-MYC, CICLINA Dl (CCNDl) y 13·CATENINA (CTNNB1) (Maetzel, 2009), sin embargo, se desconoce su papel real en la evolución tumoral.
Objetivos - Detectar y caracterizar CTCs en pacientes con CHC.
Validar el sistema Ce!ISearch (Verldex).
Testar nuevos marcadores potenciales mediante Real Time-q PCR. Validar el nuevo marcador MUCL - Estudiar la función de EpCAM en la metástasis del CHC.
Función de EpCAM en la proliferación celular.
Función de EpCAM en la invasión celular.
Función de EpCAM en la migración celular.
Materiales y métodos Análisis de CTCs en muestras de sangre de pacientes con CHC utilizando el sistema CellSearch (Veridex), técnicas de Real Time-qPCR e lmageStream AMNIS (Merck Mllllpore). Transfección del vector pCMV6-EPCAM-GFP en las líneas celulares BCLCS y BCLC6 de CHC humano y generación de líneas estables mediante selección de células EpCAM-GFP positivas por FACS (Fluorescence-Acquired Cell System). Determinación de la expresión génica (Real Time-qPCR) y proteica (Western Blot) de marcadores de proliferación y transformación celular (CCNDl, CTNNBl, MYC) y de marcadores epitellales y mesenqulmales (CDHl, VIM). Procesamiento y localización celular de EpICD por inmunofluorescencla. Anállsis de la prolíferación celular mediante ensayo de cristal violeta, migración por ensayo scratch e invasión celular mediante ensayo sobre matrlgel. Determinación de la formación de esferoides tumorales utilizando placas de nula adherencia. Como control positivo utilizamos la linea BCLC9 de CHC humano con expresión endógena de EpCAM. Caracterización celular tras el silenciamiento de CLDN7. Modelo murlno de tumor xenograft para analizar el efecto de la expresión de E CAM en metástasis a distancia.
