Resumen de Optimación del procedimiento de obtención de islotes pancreáticos humanos para trtansplante clínico - protocolo málaga
RESUMEN: La diabetes mellitus tipo 1 (DM1) es una enfermedad autoinmune causada por la destrucción autoinmune de las células beta pancreáticas, productoras de insulina. El tratamiento de esta dolencia suele Incluir inyecciones diarias de insulina exógena. El trasplante de islotes pancreáticos humanos (IPH) es una de las terapias más prometedoras en el tratamiento de la diabetes mellitus tipo 1, especialmente en pacientes con diabetes lábil, puesto que mejora su control glucémico. El procedimiento de obtención de IPH para trasplante ha sufrido leves modificaciones desde la aparición del método automático de Ricordi, constando de las fases: perfusión pancreática, digestión enzimática, dilución y purificación.
En la presente tesis se han realizado una sene de modificaciones en parte del equipamiento original empleado en la obtención de IPH. Se fabrico un modelo modificado de cámara de perfusión que logró disminuir la temperatura de la mezcla enzimática que se Introduce en el interior del árbol vascular pancreático, aproximándose más a la temperatura óptima de perfusión (4°C), Nuestro grupo diseñó un nuevo modelo de cámara de digestión que permitió un control térmico más sencillo y estable durante la digestión enzimática del órgano. Gracias a la camisa de agua que rodea la pieza inferior de la cámara se puede, además, detener la circulación de solución de perfusión sin que disminuya la temperatura su interior. Asimismo, se desarrolló un novedoso equipamiento denominado tissue trap (TT) que ha permitido realizar de forma automática la fase de dilución. El TT es una centrífuga que puede centrifugar de forma continua grandes cantidades de digerido pancreático separando de forma efectiva el tejido del sobrenadante. La utilización del tissue trap logróó reducir el personal necesario para completar la fase de dilución, disminuyendo el tiempo de procesamiento de la muestra, manteniendo la cantidad de islotes obtenidos antes y después de la purificación y la calidad de los islotes, tras comparación con el sistema estándar de dilución. Como alternativa a la refrigeración de la Cobe 2991 en cámara fría, en esta tesis se ha planteado un sistema para enfriar este sistema de aféresis basado en CO¡ líquido. El sistema de refrigeración por CO¡ líquido es un sistema con menos inercia que la cámara fría y permitió que se lograsen valores de temperatura en el interior de la centrífuga cercanos a los 4 °C. El diferencial de temperatura de los medios de purificación a su entrada y salida de la Cobe fue mínimo en el caso del sistema basado en C02 líquido. Al aislamiento realizado utilizando el conjunto de modificaciones en el aparataje descritas se le denominó protocolo Málaga. Del análisis retrospectivo de los aislamientos realizados empleando esta metodología, se dedujo que la edad y el peso del donante son factores determinantes a la obtener elevados rendimientos de islotes.
Utilizando el protocolo Málaga (excluyendo el tissue trap, cuyos trasplantes se realizaron solo en el modelo animal), se realizaron trasplantes de IPH en 2 pacientes diabéticos tipo 1 con trasplante de riñon previo bajo el régimen inmunosupresor marcado por el protocolo de Edmonton. Tras el trasplante, el control metabólico de ambos pacientes mejoró, observándose Incrementos en el péptido-C y normalización de la glucemia y la hemoglobina glicosilada. Aunque los pacientes necesitaron, ocasionalmente, dosis mínimas de insulina para controlar la glucemia, en ambos desaparecieron los episodios de glucemia inadvertida durante el tiempo de seguimiento. Las innovaciones introducidas en el protocolo Málaga contribuyen a facilitar el proceso de aislamiento, al tiempo que permiten un control más preciso de sus fases.
