Resumen de Regeneración y transformación genética de aguacate (persea americana mill.)
Uno de los factores limitantes del cultivo del aguacate (persea americana Mill.) en España es la podredumbre blanca, una enfermedad radicular causada por el hongo Rosellinia necatrix. En esta tesis se ha optimizado el proceso de regeneración de plantas vía embriogénesis somática y, paralelamente, se ha desarrollado un método de transformación genética vía Agrobacterium tumefaciens, con objeto de abordar la mejora de aguacate mediante técnicas biotecnológicas. La maduración de los embriones se ha mejorado mediante el cultivo en medio B5m10A sobre membranas de acetato de celulosa, seguido de un cultivo en medio suplementado con leche de coco, sin membrana. Hasta un 40% de embriones maduros de, al menos, 4 mm de longitud germinaron tras un pretratamiento de 3 días en medio MS líquido suplementado con 1 mg 1¯¹ BA y 1 mg 1¯¹ GA3 y posterior transferencia a medio sólido de la misma composición, durante 3 recultivos de 5 semanas cada uno. Por otro lado, se ha desarrollado un protocolo de transformación genética utilizando embriones somáticos en estado globular y la cepa hipervirulenta de A. tumefaciens AGL1, realizando la fase de selección en medio sólido suplementado con kanamicina 50 mg 1¯¹ y timentina 250 mg 1¯¹. Por primera vez en aguacate, ha sido posible la recuperación de brotes a partir de líneas transgénicas independientes, tras el cultivo de embriones somáticos, con yemas visibles, en medio MS suplementado con 1 mg 1¯¹ BA y 1 mg 1¯¹ TDZ. Los brotes obtenidos se microinjertaron en patrones de semillas germinadas in vitro, para su elongación y posterior multiplicación. Utilizando esta tecnología se han obtenido plántulas transformadas con los genes marcadores de fluorescencia gfp y DsRed, así como con el gen AtNPR1 implicado en la torelancia a patógenos fúngicos. Actualmente, se están micropropagando los brotes de diferentes líneas NPR1 para evaluar su tolerancia a Rosellinia necatrix.
