Desarrollo de un mapa genético, variación de ploidía y anomalías meióticas en el género annona
- Autores: Carolina Martín Ramos
- Directores de la Tesis: M. Ángeles Viruel Zozaya (codir. tes.), José Ignacio Hormaza Urroz (codir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Málaga ( España ) en 2013
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: María Herrero Romero (presid.), José Ángel Mercado Carmona (secret.), Antonio Pedro Martin Muñoz (voc.), Alejandro Atarés Huerta (voc.), Antonio J. Matas (voc.)
- Materias:
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- Resumen
El objetivo principal de esta tesis es el desarrollo y aplicación de marcadores moleculares para la construcción de un mapa de ligamiento base y el estudio de anomalías meióticas en el chirimoyo (Annona cherimola Mill.), un cultivo infrautilizado con claras perspectivas de expansión en zonas con climas subtropicales. Además de su interés agronómico, esta especie es de alto interés en estudios evolutivos ya que pertenece a uno de los grupos más primitivos dentro de las angiospermas.
La disponibilidad de un mapa genético de ligamiento supone una herramienta de gran utilidad para su aplicación en mejora asistida por marcadores y para profundizar en el conocimiento a nivel génico y genómico de una especie. El desarrollo de estos mapas genéticos exige disponer de poblaciones adecuadas para el seguimiento de la segregación génica y de un número relativamente elevado de marcadores que permitan cubrir el genoma. En este trabajo se ha avanzado en el desarrollo de un mapa de ligamiento a partir de un mapa base anterior que presentaba una baja eficiencia de cartografiado. Así, para aumentar el número de marcadores informativos para la elaboración del mapa, se desarrollaron nuevos marcadores microsatélites a partir de una genoteca enriquecida en secuencias AG/GT en el genotipo Thai seedless de Annona squamosa, parental masculino en un cruzamiento interespecífico con el genotipo Fino de Jete de A. cherimola, que se ha utilizado como población de mapeo. Se consiguió mejorar la eficiencia de cartografiado a pesar de la reducida heterocigosidad mostrada en `Thai seedless¿ tanto con los marcadores desarrollados específicamente en este genotipo como con marcadores desarrollados en A. cherimola y a la transferencia de la dotación diploide de uno de los parentales a la descendencia dando lugar a patrones trialélicos en un alto porcentaje de individuos que limitaron severamente la incorporación de un mayor número de marcadores al mapa. Igualmente se ha llevado a cabo la construcción de un mapa intraespecífico en chirimoyo que ha permitido establecer una elevada colinealidad de los marcadores dentro de los grupos de ligamiento establecidos y comprobar que la transferencia de la dotación diploide también ocurría en cruces intraespecíficos aunque con menor frecuencia. Para comprobar si los patrones trialélicos obtenidos con microsatélites eran resultado de una alteración en la ploidía de parte de la descendencia híbrida interespecífica se llevó a cabo un análisis de la ploidía mediante citometría de flujo que permitió identificar como triploides aquellos individuos con un elevado porcentaje de loci con patrones trialélicos. Estos resultados, junto con el análisis de la ploidía de cruzamientos intraespecíficos y del conjunto de accesiones conservadas en el Banco de germoplasma de chirimoyo del IHSM La Mayora, parecen indicar que algún tipo de factor ambiental podía estar afectando a la fase reproductiva de estas especies en la zona de estudio. Para profundizar en los posibles mecanismos implicados en esta variación de ploidía se estudió la morfología del polen y se puso a punto una técnica para amplificar ADN de granos de polen individuales. Se encontraron granos de polen de tamaño heterogéneo asociados a la producción de gametos no reducidos en los que la amplificación de ADN de granos de polen individuales mostró patrones dialélicos en los genotipos parentales y en los híbridos interespecíficos e, incluso, patrones trialélicos en los triploides además de los esperados monoalélicos en granos de polen haploides.
A nivel citogenético, el recuento de cromosomas en los genotipos parentales y en la progenie del cruce interespecífico permitió descartar la presencia de aneuploides apoyando la hipótesis de un número básico de 7 cromosomas en el género Annona. El análisis de las distintas fases de la microesporogénesis en el cruzamiento interespecífico nos permitió identificar un conjunto de anomalías meióticas que pueden explicar las variaciones de ploidía observadas y la producción de gametos no reducidos.
