Regeneración y transformación genética para la obtención de plantas de olivo resistentes a patógenos fúngicos
- Autores: Isabel Narváez Jurado
- Directores de la Tesis: Fernando Pliego Alfaro (dir. tes.), José Ángel Mercado Carmona (codir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Málaga ( España ) en 2018
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Juan Segura García del Río (presid.), Elena Palomo Ríos (secret.), Jorge Canhoto (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Biotecnología Avanzada por la Universidad de Málaga
- Materias:
- Enlaces
- Tesis en acceso abierto en: RIUMA
- Resumen
El objetivo global de esta tesis es el desarrollo de herramientas biotecnológicas para la obtención de plantas de olivo (Olea europaea L.) con mayor resistencia a patógenos fúngicos, en particular, Verticillium dahliae, agente causal de la Verticilosis, y Rosellinia necatrix, causante de la podredumbre blanca radicular, enfermedad emergente en las nuevas plantaciones de olivo.
Este objetivo global se ha abordado en tres objetivos parciales. En el primero, se ha establecido un protocolo de regeneración vía embriogénesis somática para material adulto de olivo silvestre. Para la inducción de embriogénesis, se testaron distintos medios de cultivo y tipos de explanto. Se obtuvieron cultivos embriogénicos en los genotipos StopVert y Ac-18, resistentes a Verticilosis, utilizando como explantos ápices caulinares de brotes micropropagados, cultivados durante 4 días en medio líquido MS ½ suplementado con 30 uM TDZ y 0.54 uM NAA, seguido del cultivo en el mismo medio sólido sin reguladores de crecimiento. Las plantas regeneradas a partir de callo embriogénico del genotipo StopVert no mostraron polimorfismos, en comparación con la planta donante, mediante marcadores SSR y RAPDs, así como tampoco variaciones fenotípicas con respecto a brotes micropropagados derivados de yemas laterales.
En el segundo objetivo, se evaluó la tolerancia a V. dahliae y R. necatrix en plantas de olivo que expresan el gen antifúngico afp de Aspergillus giganteus. Se transformaron cultivos embriogénicos de olivo, derivados de radícula, con un vector binario conteniendo el gen afp bajo el control del promotor constitutivo CaMV35S. Se obtuvieron 6 líneas transgénicas, 5 de las cuáles integraron el transgén, mientras que una de ellas, línea AFP13, solo incorporó el gen de selección nptII. No se observaron diferencias morfológicas con respecto al control, a excepción de la línea AFP13 que mostró un menor crecimiento. Ninguna de las líneas que expresaban el gen afp mostró resistencia frente a V. dahliae; sin embargo, se observó una correlación positiva entre el nivel de expresión afp y resistencia parcial a R. necatrix. La línea AFP13, que no expresaba afp, mostró una alta resistencia a Verticilosis. La resistencia podría estar relacionada con una variación somaclonal inducida por el cultivo in vitro, aunque los mecanismos responsables se desconocen.
En el tercer objetivo, se obtuvieron y caracterizaron líneas embriogénicas de olivo que expresan el gen AtNPR1. Este gen está implicado en la respuesta SAR y su sobreexpresión incrementa la resistencia a patógenos en distintas especies. Se obtuvieron 3 líneas de callo embriogénico transgénicas y se regeneraron plantas a partir de ellas. La expresión del transgén no modificó el crecimiento de las plantas, tanto in vitro como en invernadero. Las líneas embriogénicas fueron elicitadas con ácido salicílico y metil jasmonato, cuantificándose la actividad endoquitinasa. El tratamiento con AS no ejerció ningún efecto significativo en la actividad; por el contrario, la exposición a MeJA produjo un incremento de actividad a las 24h de exposición, siendo mayor este incremento en las líneas transgénicas que en el control. Actualmente se está evaluando la resistencia a Verticilosis en las plantas obtenidas.
