Caracterización de las señales intracelulares que regulan a nivel post-transcripcional la expresión del tnf-alfa en linfocitos t. Implicación de la proteína mnk1
- Autores: Maria Buxadé Fortuny
- Directores de la Tesis: Enric Espel Masferrer (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2001
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Miguel López Botet (presid.), Pablo Engel Rocamora (secret.), Cándido Juárez Rubio (voc.), Francisco Lozano Soto (voc.), Purificación Muñoz (voc.)
- Materias:
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- Resumen
El Factor de Necrosis Tumoral-alfa (TNFalfa), es una citocina proinflamatoria esencial y por lo tanto es una diana farmacológica importante en determinados procesos inflamatorios patológicos.
En este trabajo se ha estudiado la regulación transcripcional y post-transcripcional del TNFalfa en linfocitos T activados vía el TCR y componentes activos del suero, y las vías señalización implicadas en esta regulación.
La expresión de TNFalfa en linfociots T CD4+ puede ser inhibida con inhibidores de la fosfatidilinositol 3-quinasa, P13K (Wortmanina y LY294002), de la p38 MAPK (SB203580) y de la Erk MAPK-quinasa, MEK1 (PD98059). La P13K está involucrada en el control traduccional del TNFalfa.
Se demostró que la inducción de la traducción del TNFalfa no sólo depende de la estimulación por antígeno, sino que también está modulada por suero.
El suero incrementa la producción de TNFalfa en linfocitos T activados vía el TCR, sugiriendo que los circuitos endocrinos tienen un papel importante en la respuesta inflamatoria derivada del TNFalfa.
La MAP quinasas p38 y Erk se han relacionado con la maquinaria general de traducción, ya que controlan la activación de la quinasa MNK1, y por tanto, la fosforilación y activación del factor de inicio de la traducción eIF4E. Para estudiar la implicación de la MNK1 y el eIF4E en la eficiencia de traducción del TNFalfa en linfocitos T Jurkat, se crearon distintas construcciones con elementos del gen de TNFalfa. Se insertaron las regiones no traducidas 5' y 3' de los cDNAs de la beta-globina y del TNFalfa en una construcción con el gen reportero GFP (Green Fluorescent Protein).
Se observó que el 3'UTR del TNFalfa es inducible por estimulación con anticuerpos anti CD3+anti-CD28 en células Jurkat transfectadas con el reportero GFP. La inducibilidad de la GFP bajo el control del 3'UTR del TNFalfa es sensible a la inhibición farmacológica con los inhibidores de MEK1 y p38 MAPK.
