Separació i caracterizació d'una sèrie d'hormones peptídiques i glicoproteïnes per electroforesi capil.Lar acoblada a l'espectrometria de masses
- Autores: Elvira Balaguer Ardanuy
- Directores de la Tesis: José Barbosa Torralbo (dir. tes.), Victòria Sanz Nebot (codir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2006
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Jordi Segura Noguera (presid.), Lluís Puignou i Garcia (secret.), Fernando Albericio Palomera (voc.), Roberto Sebastiano (voc.), Angel Ríos Castro (voc.)
- Materias:
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- Resumen
El objetivo final de esta tesis ha sido establecer diferentes metodologías utilizando la electroforesis capilar acoplada a la espectrometría de masas con ionización por electrospray (CE-ESI-MS), aplicadas al análisis y caracterización de hormonas peptídicas y glicoproteínas.
En un primer momento se estudió el acoplamiento de la CE-ESI-MS en la separación de una serie de hormonas peptídicas de interés terapéutico, optimizando los principales parámetros que afectan más a la ionización y la separación con dos interfaces diferentes, una interfaz de líquido coaxial y otra interfaz sin líquido auxiliar, o sheathless. Se han comparado las dos interfaces en términos de reproducibilidad y límites de detección a fin de evaluar qué interfaz presenta mejores prestaciones.
A continuación se desarrollaron diferentes métodos de análisis de glicoproteínas intactas por CE-ESI-MS, aplicados especialmente al análisis de una glicoproteína de elevado interés: la eritropoyetina humana recombinante (rHuEPO). Se desarrollaron también métodos de análisis de las N-glicanos liberados de las diferentes glicoproteínas, y especialmente de la rHuEPO a fin de conseguir más información sobre sus carbohidratos. Se combinó la información del análisis de glicoproteínas intactas con el análisis de glicanos, y de este modo se pudo deducir una determinada composición de carbohidratos con elevada confianza.
Finalmente, se desarrollo un método de separación por CE-UV de las glicoformas de la transferrina humana en condiciones experimentales compatibles con la detección con la espectrometría de masas. De este modo se pudo diagnosticar inequívocamente desórdenes congénitos de glicosilación por CE-ESI-MS.
