Expresión y funcionalidad de las variantes del receptor de vlvl con y sin el dominio de o-glicosilación, en un modelo celular mdck y en células endoteliales
- Autores: David Sabater Martinez
- Directores de la Tesis: Ricardo Casaroli Marano (dir. tes.), Manuel Reina del Pozo (codir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2006
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Miquel Llobera Sande (presid.), Juan Francisco Montes Castillo (secret.), Julia Peinado Onsurbe (voc.), Sonia Benítez González (voc.), Conxita de Castellarnau Castellà (voc.)
- Materias:
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- Resumen
El receptor de VLDL (VLDLR) es una molécula transmembrana perteneciente a la familia del receptor de LDL (LDLR). De forma general, actualmente se acepta que VLDLR tiene un Importante papel en el metabolismo de los lípidos en los organismos vivos. Es capaz de reconocer e internalizar varios tipos de lipoproteínas, un papel que se piensa es principal a nivel de los endotelios continuos. Actúa también en otros procesos no relacionados, entre los que destaca la señalización por relina en neuronas migratorias del cerebro en desarrollo, una cuestión ampliamente explorada en los últimos años. Asimismo, su capacidad de unir HRV2 (serotipo 2 del grupo menor de rhinovirus humanos) le ha convertido en una potencial herramienta en la búsqueda de una estrategia terapéutica contra el resfriado común. Este receptor puede presentarse en dos isoformas producto de un "splicing" diferencial: una de ellas está dotada de un dominio yuxtamembrana de O-glicosilación, mientras que la segunda carece del mismo y, por ende, de los O-glúcidos asociados. Se sabe que esta última variante es inestable en la membrana plasmática, de forma que libera su ectodominio al medio extracelular en un proceso denominado "shedding" (desprendimiento), mientras que los O-glúcidos yuxtamembrana de la variante O-glicosilada la hacen resistente a este proceso.
Se desarrolló un modelo polarizado con células MDCK en el que estudiar las dos isoformas de VLDLR, caracterizando previamente su expresión y el fenómeno de "shedding" en las células no polarizadas. Se estudió posteriormente la posible función diferencial de las isoformas con respecto a la unión, la internalización o la transcitosis de un ligando fisiológico específico (VLDL) en el mismo modelo celular, determinando también el posible papel del ectodominio (o fragmento N-terminal soluble) liberado por "shedding". Finalmente, se caracterizó la expresión de las isoformas y el fenómeno de "shedding" en diferentes modelos celulares endoteliales.
Las dos isoformas de VLDLR presentan un "sorting" o direccionamiento no especifico a las superficies apical y basolateral de células polarizadas (modelo MDCK). La isoforma no O-glicosilada sufre el proceso de "shedding" en la cara apical de las células polarizadas, liberando su ectodominio al medio extracelular apical, pero en cambio se mantiene intacta en la cara basolateral; por su parte, la isoforma O-glicosilada no sufre "shedding" en ningún caso, permaneciendo anclada en las membranas, apical y basolateral. Las dos variantes de VLDLR son capaces de unir un ligando fisiológico rico en lípidos (VLDL), con afinidad y especificidad equivalentes. La capacidad de la variante no O-glicosilada está únicamente limitada a su presencia en la membrana tras sufrir el proceso de "shedding"; esto es particularmente importante en las células polarizadas, cuya superficie apical queda prácticamente desprovista de esta variante del receptor tras la proteo lisis. Ambas variantes del receptor tienen también una capacidad equivalente a la hora de mediar la internalización de las lipoproteínas unidas; nuevamente, esta actividad está condicionada por el proceso de "shedding" en el caso de la variante no O-glicosilada; sin embargo, el modelo polarizado MDCK no es operativo en la transcitosis de VLDL marcada con Dil., aún en presencia de cualquiera de las dos isoformas de VLDLR. El ectodominio soluble (fragmento N-terminal) de VLDLR, producto del "shedding" de la isoforma no O-glicosilada, tiene un potencial dominante negativo por su capacidad de unir VLDL de forma independiente, compitiendo de este modo con los receptores anclados a membrana. Tal y como ocurre en los clones MDCK, sólo aquellas células endoteliales que expresan la variante no O-glicosilada de VLDLR liberan al medio ectodominios solubles en cantidades significativas, originados por "shedding" de la citada isoforma. El "shedding" de la variante O-glicosilada es insignificante o nulo en todas las células endoteliales estudiadas. En células BAEC (endoteliales de aorta bovina), el proceso de "shedding" de la isoforma no O-glicosilada de VLDLR puede ser activado por EGF (factor de crecimiento epidérmico); en cambio, la isoforma O-glicosilada no responde a este mecanismo, permaneciendo, en cualquier caso, prevenida de la actividad proteolítica.
