Identificació d' isoformes y modificacions posttraduccionals del factor gaga de drosophila melanogaster. (identificación de isoformas y modificaciones posttraduccionales del factor gaga de drosophila melanogaster)

• Autores: Xavier Aran Guiu
• Directores de la Tesis: Jordi Bernués Martínez (dir. tes.), Ferran Azorín Marín (codir. tes.), Silvia Atrian Ventura (tut. tes.)
• Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2010
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: David Bueno i Torrens (presid.), Mª Lluïsa Espinós Janer (secret.), Marta Vilaseca Casas (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Proteínas
  • Ciencias de la vida
    • Genética
    • Biología molecular
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• Resumen

  • El factor GAGA está codificado por el gen Trithorax-like (Trl) y está implicado en una gran variedad de procesos biológicos como la remodelación de la cromatina, la activación transcripcional de genes homeóticos y de segmentación, la estabilidad cromosómica o la sincronía del ciclo celular en embriones. Existen dos isoformas de GAGA, de 519 y 581 aminoácidos respectivamente. El trabajo realizado por el doctorando ha supuesto una aproximación a la complejidad del patrón de isoformas de GAGA. Se han realizado extractos nucleares de células embrionarias de la línea SL2 de D. melanogaster y se han purificado cromatográficamente en dos resinas de intercambio iónico distintas. Las fracciones resultantes han sido procesadas mediante la técnica de electroforesis bidimensional. Esta técnica ha corroborado la complejidad de isoformas de GAGA, pues se han llegado a distinguir hasta 17 isoformas (siete correspondientes a GAGA581 y diez a GAGA519). Ensayos de defosforilación in vitro con fosfatasas han demostrado que parte de las isoformas son debidas a fosforilaciones, ya que el patrón de las muestras tratadas con fosfatasa alcalina difiere significativamente del patrón de las muestras no tratadas. Ensayos sobre la acetilación de GAGA muestran que puede ser acetilada in vitro por el dominio acetiltransferasa de PCAF, y que puede ser deacetilado por la deacetilasa SirT2 pero no por las deacetilasas HDAC1 y HDAC2. La acetilación se da en el dominio de unión a DNA de la proteína, en las lisinas K325 y K373, y existe un posible tercer lugar de acetilación fuera de este dominio, en la lisina K227. La acetilación de GAGA en este dominio repercute negativamente en su capacidad de unión a DNA. GAGA está acetilada in vivo tal y como se desprende del cambio de patrón de elecetroforesis bidimensional de la proteína a partir del tratamiento con la desacetilasa Sirt2. Los mutantes de lisina a glutamina, que en otros estudios han mostrado que pueden imitar el estado de la lisina acetilada, en este caso particular no han conseguido reproducir los efectos de la acetilación sobre la proteína. Este hecho se ve respaldado por las simulaciones de dinámica molecular utilizando como modelo la estructura de NMR del dominio de unión acomplejado con el DNA.