Resumen de Caracterización de mj1213 de methanococcus jannaschii, una metaloproteasa hipertermófila y potencialmente similar a blar1 de staphylococcus aureus
Methano(caldo)coccus jannaschii es un miembro del reino Archaea anaeróbico y metanógeno aislado de una chimenea hidrotermal del Pacífico Este. Es uno de los arqueas mejor conocidos desde su descubrimiento (Jones 1983) y el primer organismo arquea cuyo ADN fue secuenciado (Bult et al. 1996). El uso de homólogos arqueas es una buena opción para la caracterización de nuevas proteínas, dada la gran solubilidad, estabilidad y fácil manejo de aquéllos. Existen cada vez más evidencias de que la estructura de las proteínas está más conservada que su secuencia (Wild et al. 2004), como por ejemplo el hecho de que la mayoría de proteínas cuya estructura se resuelve muestran plegamientos ya conocidos (Christendat et al. 2000) y las clasificaciones por homólogos estructurales permiten inferir la función de la mayoría de dominios mediante un análisis comparativo (Zarembinski, 1998; Christendat, 2000; Yakunin, 2004; Wild, 2004).
El gen mj1213 de M.jannaschii. codifica para una hipotética metaloproteasa (MP) del tipo zincina, MJ1213 o Q58610, clasificada como tal debido a la presencia en su secuencia del motivo consenso de éstas: HExxH. Esta proteína podría representar un nuevo grupo estructural dentro de las zincinas, además de aportar datos importantes para la resolución de BlaR1, el sensor-transductor de la señal del sistema de resistencia a antibióticos ß-lactámicos, cuyo dominio metaloproteasa es homólogo a MJ1213. La estructura de BlaR1 no ha sido resuelta dado el fracaso que han supuesto los intentos de purificar la proteína entera o de expresar el domnio MP por separado, de la misma manera que no se conoce el macanismo exacto de su actividad. Se ha hipotetizado que tras su activación por la presencia de antibiótico en el medio, el dominio MP de BlaR1 hidrolizaría el dímero BlaI, que en reposo bloquea la transcripción del operón bla, permitiendo su transcripción, pero no existen evidencias experimentales de si esta proteólisis la realiza directamente o de manera indirecta a través de una hipotética proteína BlaR2 (Lewis, 1999; Zhang, 2001; Fileé, 2002 y Hanique, 2004).
En este trabajo se describe el clonaje, expresión, purificación y cristalización de MJ1213 así como de su mutante para Met y de su derivado de seleno-metionina, además de su caracterización físico-química y de la determinación de su perfil de actividad.
